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【医技】检验科医疗诊疗规范——第一篇 临床化学与免疫检验81-90

作者:王泓 日期:2014-06-19

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    【临床意义】
    Cl-INH属于急性时相反应蛋白，在急性炎症时，不仅肝脏产生上述成分，巨噬细胞也产生。在全身感染、非感染性慢性炎症状态及生理情况如妊娠时可见升高。
    Cl-INH缺乏主要见于遗传性血管神经性水肿、获得性血管神经性水肿和毛细血管渗出综合征。
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血2.5ml（血清或枸橼酸钠抗凝血浆）；血清尽可能新鲜，血清样本必须完全凝固，离心后不能含有颗粒或纤维蛋白残留物。
    2.血清或血浆常温稳定6小时，2~8℃稳定8天，-20℃稳定1年。
    【方法与原理】
    1.方法 免疫散射比浊法。
    2.原理 人血清或血浆样本中的Cl抑制物与试剂中的抗体发生特异性抗原抗体反应，形成免疫复合物。这些免疫复合物会使穿过样本的光束发生散射。散射光的强度与样本中Cl抑制物的浓度成正比。
    【仪器】
    SIEMENS BNⅡ全自动蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商Siemens公司。
    （1）试剂：由高纯度的人Cl抑制物免疫兔子而制成的。
    （2）辅助试剂：辅助试剂由含有氯化钠（8.5g/L）和Thesit（50g/L）的磷酸盐缓冲溶液（0.05mol/L）组成。可以直接使用。
    2.试剂稳定性2~8℃保存可稳定至效期；开封试剂应在每次使用后盖紧盖子，2~8℃可以储存4周；试剂于仪器中每天上机8小时，可稳定5天，或长度相当的时间（40小时）。
    3.质控品 Siemens公司提供的N/T Protein Control PY，货号OWSY13。
    4.校准品 Siemens公司提供的N Protein Standard PY，货号OUID13。
    【项目校准】
    1.仪器会自动用N稀释剂稀释Cl抑制物标准品，该标准品稀释液应该在4小时内使用。
    2.更换试剂批号后需校准。
    3.维护保养如更换光源、清洁光路及更换主要部件后需校准。
    4.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意需重新校准。
    5.特殊情况校准要求参见仪器操作维护手册及试剂说明书。
    【性能参数】
    1.精密度

批内
批间
n
平均值（g/L）
CV%
n
平均值（g/L）
CV%
30
0.23
1.5
10
0.24
1.6

    2.样本的检测 样本被N稀释液自动稀释成1：5倍后进行测量。如果测得的读数超出了测量范围，可使用样本的更高的稀释浓度重复检测。
    3.干扰 脂血或混浊的标本可能干扰测定结果。脂血标本可通过高速离心（15 000转/分钟，离心15分钟）后取下层清亮标本测定。
    【参考范围】
    血清：0.21~0.39g/L。
    【临床意义】
    C3是补体各成分中含量最高的~种，且是补体激活途径中最重要的环节，故其含量的测定非常重要。C3增多与减少与总补体活性基本相符，但更为敏感。
    1.升高 C3属于急性时相反应蛋白，在急性炎症，传染病早期，恶性肿瘤、移植物排斥反应和组织损伤时可升高。
    2.降低 见于肾小球肾炎，SLE活动期，自身免疫性溶血，冷球蛋白血症，类风湿性关节炎，新生儿呼吸窘迫综合征、菌血症、组织损害和慢性肝炎等疾病。遗传性C3缺乏症、营养不良的儿童也可见C3含量降低。约70%~80%的急性肾小球肾炎、狼疮性肾炎患者血清C3含量减少，病情缓解后可恢复正常，故C3的测定不仅有助于诊断，还可以观察疗效和监测预后。
    【标本要求】
    1.建议使用血清样本。
    2.空腹采集静脉血3ml，采集后两小时内离心分离血清。血清样本常温稳定6小时，2~8℃稳定24小时，超过24小时未测定应在-20℃冷冻保存。如果重复冻融，样本中的分析物会发生变化。
    【方法与原理】
    1.方法速率散射比浊法。
    2.原理试剂中的羊抗人C3抗体和待测样本中的C3形成抗原抗体复合物，悬浮在缓冲液中使散射光信号发生变化，通过测定信号增长的速率决定抗原浓度。
   【仪器】
    Beckrnan Coulter公司IMMAGE 800全自动特定蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter公司。
    2.试剂盒 抗体：羊抗人C3抗血清7.5ml。
    3.试剂稳定性 每天的工作完成后，将试剂盒放回到冰箱中（2~8℃）。使用防蒸发盖的情况下，C3试剂可以在机上稳定30天。
    4.缓冲液1和稀释液1 使用防蒸发盖，在系统上可以稳定30天。
    5.校准品Beckman公司定标液1（P/N449560），密闭保存在原装容器内，储存条件2~8℃，可以一直稳定到瓶上所示有效期。
6.质控品 Beckman公司配套定值质控品，正常值和异常值两个水平。PROT CTL LEVl（450120）； PROT CTL LEV3（450130）。
    【参数设置】
    反应杯中样本和试剂的起始用量

样本量
总试剂量
抗体
缓冲液1
稀释液1
0.58μl
341.42μl
21μl
300μl
20.42μl

    【项目校准】
    1.定标液1 IMMAGE免疫化学系统的定标是批特异性的。试剂出厂时采用多点定标，用户操作时使用单点确认，进行截距的调整。
    2.更换试剂批号或缓冲液1的批号后应校准。
    3.更换特定部件时（如光源、比色杯）和保养程序后，试剂应重新定标。
    4.质控失控后，在排除其他影响因素后，质控结果仍不满意的，应重新定标。
    5.C3定标稳定期为30天。
    【性能参数】
    1.分析范围使用起始血清样本稀释度1： 36进行C3浓度测定。

样本类型
Beckman Coulter分析范围
血清
起始范围：35~350mg/dl
扩大范围：5.83~12 600mg/dl

    2.精密度 IMMAGE免疫化学系统评估的比较性能数据使用NCCLS建议的EP5-T2方案，结果见表1-5。
    表1-5 C3的精密度评估结果

精密度类型
样本
数据点
检测平均值（mg/dl）
SD（mg/dl）
%CV
    批内
血清水平1
80
70.3
1.79
2.5
血清水平2
80
106.0
3.10
2.9
总
血清水平1
80
70.3
2.09
3.0
血清水平2
80
106.0
3.90
3.6

    3.干扰
    （1）在起始样本稀释度下，检测了以下物质在血清中对使用该方法学进行C3检测的干扰：

物质
来源
检测的水平
观察结果
胆红素
脂类
血红蛋白
猪
人甘油三酯
人
5~30mg/dl
150~1000mg/dl
100~500mg/dl
无
无+
无

使用浊度法进行特种蛋白的定量测定不宜应用于脂血样本，因为该样本具有强烈的光发散特性。
    脂血标本可通过高速离心（15000转/分钟离心15分钟）后取下层清亮标本测定
    （2）当机外的分析稀释度低于1： 36时，在较低稀释度的血清样本和使用多聚物增强剂的缓冲液之间会发生非特异性反应。
    【临床意义】
    C4参与补体经典激活途径，其含量仅低于C3，是补体中重要组分之一。
    1.升高 见于风湿热急性期、结节性周围动脉炎、皮肌炎、心肌梗死、Reiter综合征、多关节炎等。
    2.降低 见于遗传性血管性水肿、急性肾炎、慢性活动性肝炎、类风湿性关节炎、IgA肾病等。SLE患者，C4的降低常早于其他补体成分，且较其他成分回升迟。狼疮性肾炎较非狼疮性肾炎C4含量显著低下。
    【标本要求】
    1.建议使用血清样本。
    2.空腹采集静脉血3ml，采集后两小时内离心分离血清。血清样本常温稳定6小时，2~8℃稳定24小时，超过24小时未测定应在-20℃冷冻保存。如果重复冻融，样本中的分析物会发生变化。
    【方法与原理】
    1.方法 速率散射比浊法。
    2.原理 试剂中的羊抗人C4抗体和待测样本中的C4形成抗原抗体复合物，悬浮在缓冲液中使散射光信号发生变化，通过测定信号增长的速率决定抗原浓度。
    【仪器】
    Beckman Coulter公司IMMAGE 800全自动特定蛋白分析仪。
    【试剂及配套品】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter公司。
    2.试剂盒 抗体：羊抗人C4抗血清7.5ml。
    3.试剂稳定性 每天的工作完成后，将试剂盒放回到冰箱中（2~8℃）。使用防蒸发盖的情况下，C4试剂可以在机上稳定30天。
    4.缓冲液1和稀释液1 使用防蒸发盖，在系统上可以稳定30天。
    5.校准品 Beckman公司定标液1（P/N449560），密闭保存在原装容器内，储存条件2~8℃，可以一直稳定到瓶上所示有效期。
   6.质控品 Beckman公司配套定值质控品，正常值和异常值两个水平。PROT CTL LEVl（450120）； PROT CTL LEV3（450130）。
    【参数设置】
    反应杯中样本和试剂的起始用量

样本量
总试剂量
抗体
缓冲液l
稀释液1
0.58μl
341.42μl
21μl
300μl
20.42μl

    【项目校准】
    IMMAGE免疫化学系统的定标是批特异性的。试剂出厂时采用多点定标，用户操作时使用单点确认，进行截距的调整。
    1.更换试剂批号或缓冲液1的批号后应校准。
    2.更换特定部件时（如光源、比色杯）和保养程序后，试剂应重新定标。
    3.质控失控后，在排除其他影响因素后，质控结果仍不满意的，应重新定标。
    4.C4定标稳定期为30天。
    【性能参数】
    1.分析范围 使用起始血清样本稀释度1：36进行补体C4浓度测定。

样本类型
Beckman Coulter分析范围
血清
起始范围：10~130mg/dl
扩大范围：1.67~4680mg/dl

    2.精密度 IMMAGE免疫化学系统评估的比较性能数据使用NCCLS建议的EP5-T2方案，结果见表1-6。
    表1-6 C4的精密度评估结果

精密度类型
样本
数据点
检测平均值（mg/dl）
SD（mg/dl）
%CV
血清水平1
80
18.8
0.60
3.2
批内
血清水平2
80
42.9
1.45
3.4
血清水平3
80
65.5
1.65
2.5
总
血清水平1
80
18.8
0.65
3.4
血清水平2
80
42.9
2.21
5.2
血清水平3
80
65.5
2.46
3.7

    3.干扰
    （1）在起始样本稀释度下，检测了以下物质在血清中对使用该方法学进行
    C4检测的干扰：

物质
来源
检测的水平
观察结果
胆红素
脂类
血红蛋白
猪
人甘油三酯
人
5~30mg/dl
150~1000mg/dl
100~500mg/dl
无
无+
无

使用浊度法进行特种蛋白的定量测定不宜应用于脂血样本，因为该样本具有强烈的光发散特性。
    脂血标本可通过高速离心（15000转/分钟离心15分钟）后取下层清亮标本测定
    （2）当机外的分析稀释度低于1： 36时，在较低稀释度的血清样本和使用多聚物增强剂的缓冲液之间会发生非特异性反应。
    【临床意义】
    1.多克隆免疫球蛋白水平升高主要见于感染、肿瘤、自身免疫性疾病、慢性活动性肝炎及肝硬化等。
    2.单克隆免疫球蛋白水平的增加又称M蛋白病，主要见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、轻链病及恶性淋巴瘤等。
    3.一种或多种免疫球蛋白水平的减少分为原发性和继发性的。前者属于遗传性，如先天性丙种球蛋白缺乏症，选择性IgM、IgA缺乏症等。继发性缺损见于网状淋巴系统恶性疾病、慢性淋巴细胞性白血病、肾病综合征、大面积烧伤烫伤、长期大剂量使用免疫抑制剂或受放射线照射等。
    4.年龄与血中的免疫球蛋白含量有一定关系，新生儿由母体获得通过胎盘转移而来的IgG，血清含量较高，接近成人水平。婴幼儿由于体液免疫功能不成熟，免疫球蛋白含量较成人低。
    【标本要求】
    1.建议使用血清样本。
    2.空腹采集静脉血3ml，采集后两小时内离心分离血清。血清样本常温稳定8小时，2~8℃稳定72小时，超过72小时未测定应在-20℃冷冻保存。冷冻样本只能融化一次，如果重复冻融，样本中的分析物会发生变化。
    检测系统1：Beckman Coulter IMMAGE 800
    【方法与原理】
    1.方法 速率散射比浊法。
    2.原理 试剂中的羊抗人IgA抗体和待测样本中的IgA形成抗原抗体复合物，悬浮在缓冲液中使散射光信号发生变化，通过测定信号增长的速率决定抗原浓度。
    【仪器】
    Beckman Coulter公司IMMAGE 800全自动特定蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter公司。
    2.试剂盒 抗体：羊抗人IgA抗血清7.5ml，抗原过量检测溶液（AGXS）7.5ml。
    3.试剂稳定性 每天的工作完成后，将试剂盒放回到冰箱中（2~8℃）。使用防蒸发盖的情况下，IgA试剂可以在机上稳定30天。
    4.缓冲液1和稀释液1 使用防蒸发盖，在系统上可以稳定30天。
    5.校准品 Beckman公司定标液1（P/N449560），将定标液盖好盖子保存在原装容器内，储存条件2~8℃，可以一直稳定到瓶上所示有效期。
    6.质控品 Beckman公司配套定值质控品，正常值和异常值两个水平。PROT CTL LEVl（450120）； PROT CTL LEV3 （450130）。按照IMMAGE操作手册的具体规定，在每一次新的定标，使用新批号的试剂或缓冲液，在特定维修或者出现故障后，都应该运行质控。每天检测临床标本前必须运行质控。
    【参数设置】
    反应杯中样本和试剂的起始用量

样本量
总试剂量
抗体
缓冲液1
稀释液l
0.58μl
341.42μl
21μl
300μl
20.42μl

    【项目校准】
    1.定标液1 IMMAGE免疫化学系统的定标是批特异性的。试剂出厂时采用多点定标，用户操作时使用单点确认，进行截距的调整。
    2.更换试剂批号或缓冲液1的批号后应校准。
    3.更换特定部件时（如光源、比色杯）和保养程序后，试剂应重新定标。
    4.质控失控后，在排除其他影响因素后，质控结果仍不满意的，应重新定标。
    5.IgA定标稳定期为30天。
    【性能参数】
    1.分析范围 使用起始血清样本稀释度1： 36进行IgA浓度测定。

样本类型
BECKMANCOULTER分析范围
血清
起始范围：40~700mg/dl
扩大范围：6.7~25200.0mg/dl

    2.精密度 IMMAGE免疫化学系统评估的比较性能数据使用NCCLS建议的EP5-T2方案，结果见表1-7。
    表1-7 IgA的精密度评估结果

精密度类型
样本
数据点
检测平均值（mg/dl）
SD（mg/dl）
%CV
血清水平1
80
126
3.7
2.9
批内
血清水平2
80
268
7.6
2.8
血清水平3
80
605
15.4
2.5
总
血清水平1
80
126
4.4
3.5
血清水平2
80
268
8.3
3.1
血清水平3
80
605
19.5
3.2

    3.干扰
    （1）在起始样本稀释度下，检测了以下物质在血清中对使用该方法学进行IgA检测的干扰：

物质
来源
检测的水平
观察结果
胆红素
脂类
血红蛋白
猪
人甘油三酯
人
5~30mg/dl
150~1000mg/dl
100~500mg/dl
无
无+
无

    使用浊度法进行特种蛋白的定量测定可能不宜应用于脂血样本，因为该样本具有强烈的光发散
    特性
    （2）当机外的分析稀释度低于1： 36时，在较低稀释度的血清样本和使用多聚物增强剂的缓冲液之间会发生非特异性反应。
    检测系统2：Siemens BNⅡ
    【方法与原理】
    1.方法 免疫散射比浊法。
    2.原理 在免疫化学反应中，待测样本中的IgA与特异性的抗体（高纯度人免疫球蛋白A免疫兔子而制成的）形成免疫复合物。这些免疫复合物会使穿过比色杯的光束发生散射。散射光的强度与标本中的IgA浓度成正比。与已知的标准浓度对比就可得出结果。
    【仪器】
    Siemens BNⅡ全自动蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商Siemens公司。
    2.试剂IgA抗体是用高纯度人免疫球蛋白免疫兔子而制成的。
    3.试剂稳定性未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，如果每次使用后立即密封保存在2~8℃条件下，试剂可以使用10天；上机可稳定5天（每天8小时）或相当于此的时间长度（最多40小时）。
    4.质控品 Siemens公司提供的N/T蛋白质控SL/L、M、H，货号QQIN、QQIO和QQIP。
    5.校准品Siemens公司提供的N蛋白标准品SL，货号QQIM。使用时温度平衡至15~25℃，轻轻颠倒混匀，避免强烈晃动形成泡沫。N蛋白标准品SL在2~8℃的保存条件下，可稳定至标签上的有效期。开封使用后，立即密封保存在2~8℃下，可稳定14天。
    【项目校准】
    1.仪器会自动用稀释剂准备以下稀释度的蛋白标准品SL来测量IgA：l：5、1：10、1： 20、1： 40、1：80及1： 160。该标准品稀释液应该在4小时内使用。
    2.参考曲线的有效期为10天。超过这个期限后，只要室内质控保持在相应的置信区间内，则该曲线就可以继续使用。然而，对每一个新批次的试剂，都应该建立新的参考曲线。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    4.维护保养后如更换光源、清洁光路及更换主要部件后应进行项目校准。
    【性能参数】
    1.精密度（厂家）n＝40

平均值
检测内
检测间
总计
标本
（g/L）
CV（%）
CV（%）
CV（%）
N/T蛋白质控品SL/L
1.0
3.7
1.6
3.4
N/T蛋白质控品SL/M
1.7
2.7
3.3
2.1
N/T蛋白质控品SL/H
2.5
2.1
2.5
2.7
EDTA血浆混合库1
2.0
2.1
3.2
2.3
EDTA血浆混合库2
2.5
2.3
2.6
2.4

    2.灵敏度 该检测的灵敏度由参考曲线的下限确定，所以每批试剂的检测下限略有不同，IgA灵敏度一般在＜0.25g/L左右。
    3.干扰 样本中的混浊和颗粒会干扰测定。由不完全凝血或蛋白变性造成的颗粒，必须在检测前通过离心去除。脂血标本可通过高速离心（15000转/分钟离心15分钟）后取下层清亮标本测定。胆红素达到600mg/L、甘油三酸酯达到5.7g/L和游离血红蛋白浓度为10g/L时不会干扰检测（±20%）。
    【参考范围】
    本实验室：血清IgA：0.7~3.8g/L。
    【临床意义】
    1.多克隆免疫球蛋白水平升高主要见于感染、肿瘤、自身免疫性疾病、慢性活动性肝炎及肝硬化等。
    2.单克隆免疫球蛋白水平的增加 又称M蛋白病，主要见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、轻链病及恶性淋巴瘤等。
    3.一种或多种免疫球蛋白水平的减少分为原发性和继发性的。前者属于遗传性，如先天性丙种球蛋白缺乏症，选择性IgM、IgA缺乏症等。继发性缺损见于网状淋巴系统恶性疾病、慢性淋巴细胞性白血病、肾病综合征、大面积烧伤烫伤、长期大剂量使用免疫抑制剂或受放射线照射等。
    4.年龄与血中的免疫球蛋白含量有一定关系，新生儿由母体获得通过胎盘转移而来的IgG，血清含量较高，接近成人水平。婴幼儿由于体液免疫功能不成熟，免疫球蛋白含量较成人低。
    5.建议使用血清样本。
    6.空腹采集静脉血3ml，采集后两小时内离心分离血清。血清样本常温稳定8小时，2~8℃稳定72小时，超过72小时未测定应在-20℃冷冻保存。冷冻样本只能融化一次，如果重复冻融，样本中的分析物会发生变化。
    7.CSF样本在分析前应该进行离心，去除可能存在的细胞杂质和细菌污染物。CSF样本收集后如不及时进行分析，应该储存在2~8℃，样本可以冷冻。
    检测系统1：Beckman Coulter IMMAGE 800
    【方法与原理】
    1.方法 速率散射比浊法。
    2.原理 试剂中的羊抗人IgG抗体和待测样本中的IgG形成抗原抗体复合物，悬浮在缓冲液中使散射光信号发生变化，通过测定信号增长的速率决定抗原浓度。
    【仪器】
   Beckman Coulter公司IMMAGE 800全自动特定蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter公司。
    2.试剂盒 抗体：羊抗人IgG抗血清7.5ml，抗原过量检测溶液（AGXS）2.2ml。
    3.试剂稳定性 每天的工作完成后，将试剂盒放回到冰箱中（2~8℃）。使用防蒸发盖的情况下，IgG试剂可以在机上稳定30天。
    4.缓冲液1和稀释液1 使用防蒸发盖，在系统上可以稳定30天。
    5.校准品 Beckman Coulter公司定标液1（P/N449560），将定标液盖好盖子保存在原装容器内，储存条件2~8℃，可以一直稳定到瓶上所示有效期。
    6.质控品 Beckman Coulter公司配套定值质控品，正常值和异常值两个水平。PROT CTL LEVl（450120）；PROT CTL LEV3 （450130）。新的定标，使用新批号的试剂或缓冲液，在特定维修或者出现故障后，都应该运行质控。每天检测临床标本前必须运行质控。
    【参数设置】
    反应杯中样本和试剂的起始用量

血清
CSF
样本量
总试剂量
抗体
缓冲液1
稀释液1
0.10μl
341.90μl
21μl
300μl
20.90μl
21μl
321μ1
21μl
300μl

    【项目校准】
    IMMAGE免疫化学系统的定标是批特异性的。试剂出厂时采用多点定标，用户操作时使用单点确认，进行截距的调整。
    1.更换试剂批号或缓冲液1的批号后应校准。
    2.更换特定部件时（如光源、比色杯）和保养程序后，试剂应重新定标。
    3.质控失控后，在排除其他影响因素后，质控结果仍不满意的，应重新定标。
    4.IgG定标稳定期为30天。
    【性能参数】
    1.分析范围 使用起始血清样本稀释度1：216，起始原倍CSF样本稀释度进行IgG浓度测定。

样本类型
BeckmanCoulter分析范围
血清

CSF
起始范围：200~3600mg/dl
扩大范围：33.3~21600mg/dl
起始范围：0.93~16.7mg/dl
扩大范围：0.93~3600mg/dl

    2.精密度 IMMAGE免疫化学系统评估的比较性能数据使用NCCLS建议的EP5-T2方案，结果见表1-8。
   表1-8 IgG的精密度评估结果

精密度类型
样本
数据点
检测平均值（mg/dl）
SD（mg/dl）
%CV
血清水平1
80
549
10.8
2.0
批内
血清水平2
80
1293
33.3
2.6
血清水平3
80
2362
51.2
2.2
血清水平1
80
549
13.7
2.5
总
血清水平2
80
1293
39.1
3.0
血清水平3
80
2362
89.6
3.8

    3.干扰
    （1）在起始样本稀释度下，检测了以下物质在血清中对使用该方法学进行IgG检测的干扰：

物质
来源
检测的水平
观察结果
胆红素
脂类
血红蛋白
猪
人甘油三酯
人
5~30mg/dl
150~l000mg/dl
100~500mg/dl
无
无+
无

使用浊度法进行特种蛋白的定量测定可能不宜应用于脂血样本，因为该样本具有强烈的光发散特
    性。脂血标本可通过高速离心（15000rpmX 15min）后取下层清亮标本测定
    （2）当机外的分析稀释度低于1： 36时，在较低稀释度的血清样本和使用多聚物增强剂的缓冲液之间会发生非特异性反应。
    （3）污染有血的CSF样本会造成蛋白检测结果的明显偏差。
    检测系统2：Siemens BNⅡ
    【方法与原理】
    1.方法 免疫散射比浊法。
    2.原理 在免疫化学反应中，待测样本中的IgG与特异性的抗体（高纯度人免疫球蛋白G免疫兔子而制成的）形成免疫复合物。这些免疫复合物会使穿过比色杯的光束发生散射。散射光的强度与标本中的IgG浓度成正比。与已知的标准浓度对比就可得出结果。
    【仪器】
    Siemens BNⅡ全自动蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商Siemens公司。
    2.试剂 IgG抗体是用高纯度人免疫球蛋白免疫兔子而制成的。
    3.试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，如果每次使用后立即密封保存在2~8℃条件下，试剂可以使用10天；上机可稳定5天（每天8小时）或相当于此的时间长度（最多40小时）。
    4.质控品 Siemens公司提供的N/T蛋白质控SL/L、M、H，货号QQIN、QQIO和QQIP。
    5.校准品 Siemens公司提供的N蛋白标准品SL，货号QQIM。使用时温度平衡至15~25℃，轻轻颠倒混匀。避免强烈晃动（防止形成泡沫）。N蛋白标准品SL在2~8℃的保存条件下，可稳定至标签上的有效期。一旦开封使用后，立即密封保存在2~8℃下，可稳定14天。
    【项目校准】
    1.仪器会自动用稀释剂准备以下稀释度的蛋白标准品 SL来测量IgG：1：80、1： 160、1： 320、1： 640、1：1280及1： 2560。该标准品稀释液应该在4小时内使用。
    2.参考曲线的有效期为10天。超过这个期限后，只要室内质控保持在相应的置信区间内，则该曲线就可以继续使用。对每一个新批次的试剂，都应该建立新的参考曲线。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    4.维护保养后如更换光源、清洁光路及更换主要部件后应进行项目校准。
    【性能参数】
    1.精密度（厂家）n=40

平均值
检测内
检测间
总计
标本
（g/L）
CV（%）
CV（%）
CV（%）
N/T蛋白质控品SL/L
5.0
2.1
3.0
3.4
N/T蛋白质控品SL/M
8.4
1.4
1.8
2.1
N/T蛋白质控品SL/H
12.1
1.5
2.6
2.7
EDTA血浆混合库l
8.8
1.7
1.8
2.3
EDTA血浆混合库2
12.7
1.5
2.2
2.4

    2.灵敏度 该检测的灵敏度由参考曲线的下限确定，所以每批试剂的检测下限略有不同，IgG灵敏度一般＜0.07g/L。
    3.干扰 样本中的混浊和颗粒会干扰测定。由不完全凝血或蛋白变性造成的颗粒，必须在检测前通过离心去除。高度脂血样本必须通过离心（大约15 000×g离心10分钟）进行澄清。胆红素达到600mg/L、甘油三酸酯达到19 g/L和游离血红蛋白浓度为10g/L时不会干扰检测（±20%）。脂血标本可通过高速离心（15 000rpm×15min）后取下层清亮标本测定。
    【参考范围】
    本实验室：血清IgG：7.0~17.0g/L。
    脑脊液IgG：0.01~0.04g/L。
    【临床意义】
    1.多克隆免疫球蛋白水平升高主要见于感染、肿瘤、自身免疫性疾病、慢性活动性肝炎及肝硬化等。
    2.单克隆免疫球蛋白水平的增加 又称M蛋白病，主要见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、轻链病及恶性淋巴瘤等。
    3.一种或多种免疫球蛋白水平的减少分为原发性和继发性的。前者属于遗传性，如先天性丙种球蛋白缺乏症，选择性IgM、IgA缺乏症等。继发性缺损见于网状淋巴系统恶性疾病、慢性淋巴细胞性白血病、肾病综合征、大面积烧伤烫伤、长期大剂量使用免疫抑制剂或受放射线照射等。
    4.年龄与血中的免疫球蛋白含量有一定关系，新生儿由母体获得通过胎盘转移而来的IgG，血清含量较高，接近成人水平。婴幼儿由于体液免疫功能不成熟，免疫球蛋白含量较成人低。
    【标本要求】
    1.建议使用血清样本。
    2.空腹采集静脉血3ml，采集后两小时内离心分离血清。血清样本常温稳定8小时，2~8℃稳定72小时，超过72小时未测定应在-20℃冷冻保存。冷冻样本只能融化一次，如果重复冻融，样本中的分析物会发生变化。
    检测系统l：Beckman Coulter IMMAGE 800
    【方法与原理】
    1.方法 速率散射比浊法。
    2.原理 试剂中的羊抗人IgM抗体和待测样本中的IgM形成抗原抗体复合物，悬浮在缓冲液中使散射光信号发生变化，通过测定信号增长的速率决定抗原浓度。
    【仪器】
    Beckman Coulter公司IMMAGE 800全自动特定蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter公司。
    2.试剂盒 抗体：羊抗人IgM抗血清7.5ml；抗原过量检测溶液（AGXS）7.5ml。
    3.试剂稳定性 每天的工作完成后，将试剂盒放回到冰箱中（2~8℃）。使用防蒸发盖的情况下，IgM试剂可以在机上稳定30天。
    4.缓冲液1和稀释液1 使用防蒸发盖，在系统上可以稳定30天。
    5.校准品 Beckman Coulter公司定标液1（P/N449560），密闭保存在原装容器内，储存条件2~8℃，可以一直稳定到瓶上所示有效期。
    6.质控品 Beckman公司配套定值质控品，正常值和异常值两个水平。PROT CTL LEVl（450120）； PROT CTL LEV3（450130）.
    【参数设置】
    反应杯中样本和试剂的起始用量

样本量
总试剂量
抗体
缓冲液l
稀释液1
0.58μl
341.42μl
21.00μl
300.00μl
20.42μl

    【项目校准】
    1.IMMAGE免疫化学系统的定标是批特异性的。试剂出厂时采用多点定标，用户操作时使用单点确认，进行截距的调整。
    2.更换试剂批号或缓冲液1的批号后应校准。
    3.更换特定部件时（如光源、比色杯）和保养程序后，试剂应重新定标。
    4.质控失控后，在排除其他影响因素后，质控结果仍不满意的，应重新定标。
    5.IgM定标稳定期为30天。
    【性能参数】
    ↑1.分析范围 使用起始血清样本稀释度1：36进行IgM浓度测定。

样本类型    Beckman Coulter分析范围
血清起始范围：25~400mg/dl
扩大范围：4.2~14 400mg/dl

    2.精密度 IMMAGE免疫化学系统评估的比较性能数据使用NCCLS建议的EP5-T2方案，结果见表1-9。
    表1-9 IgM的精密度评估结果

精密度类型
样本
数据点
检测平均值（mg/dl）
SD（mg/dl）
%CV
血清水平1
80
53.8
1.56
2.9
批内
血清水平2
80
115.0
2.70
2.4
血清水平3
80
334.0
10.60
3.2
血清水平1
80
53.8
1.90
3.5
总
血清水平2
80
115.0
3.30
2.9
血清水平3
80
334.0
11.30
3.4

    3.干扰
    （1）在起始样本稀释度下，检测了以下物质在血清中对使用该方法学进行IgM检测的干扰：

物质
来源
检测的水平
观察结果
胆红素
脂类
血红蛋白
猪
人甘油三酯
人
5~30mg/dl
150~1000mg/dl
100~500mg/dl
无
无+
无

使用浊度法进行特种蛋白的定量测定可能不宜应用于脂血样本，因为该样本具有强烈的光发散特
    性。脂血标本可通过高速离心（15 000rpmX15min）后取下层清亮标本测定
    （2）当机外的分析稀释度低于1： 36时，在较低稀释度的血清样本和使用多聚物增强剂的缓冲液之间会发生非特异性反应。
    检测系统2：Siemens BNⅡ
    【方法与原理】
    1.方法 免疫散射比浊法。
    2.原理 在免疫化学反应中，待测样本中的IgM与特异性的抗体（高纯度人免疫球蛋白M免疫兔子而制成的）形成免疫复合物。这些免疫复合物会使穿过比色杯的光束发生散射。散射光的强度与标本中的IgM浓度成正比。与已知的标准浓度对比就可得出结果。
    【仪器】
    Siemens BNⅡ全自动蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商Siemens公司。
    2.试剂 IgM抗体是用高纯度人免疫球蛋白免疫兔子而制成的。
    3.试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，如果每次使用后立即密封保存在2~8℃条件下，试剂可以使用10天；上机可稳定5天（每天8小时）或相当于此的时间长度（最多40小时）。
    4.质控品Siemens公司提供的N/T蛋白质控SL/L、M、H，货号QQIN、QQIO和QQIP。
    5.校准品 Siemens公司提供的N蛋白标准品SL，货号QQIM。使用时温度平衡至15~25℃，轻轻颠倒混匀。避免强烈晃动形成泡沫。N蛋白标准品SL在2~8℃的保存条件下，可稳定至标签上的有效期。一旦开封使用后，立即密封保存在2~8℃下可稳定14天。
    【项目校准】
    1.仪器会自动用稀释剂准备以下稀释度的蛋白标准品 SL来测量IgM：1：2.5、1：5、1： 10、1：20及1：80，该标准品稀释液应该在4小时内使用。
    2.参考曲线的有效期为10天。超过这个期限后，只要室内质控保持在相应的置信区间内，则该曲线就可以继续使用。然而，对每一个新批次的试剂，都应该建立新的参考曲线。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    4.维护保养后如更换光源、清洁光路及更换主要部件后应进行项目校准。
    【性能参数】
    1.精密度（厂家）n＝40

平均值
检测内
检测间
总计
标本
（g/L）
CV（%）
CV（%）
CV（%）
N/T蛋白质控品SL/L
0.40
4.0
3.8
5.3
N/T蛋白质控品SL/M
0.69
1.9
3.2
3.4
N/T蛋白质控品SL/H
0.90
1.7
2.6
2.8
EDTA血浆混合库1
0.76
1.9
2.2
2.7
EDTA血浆混合库2
1.12
1.7
1.7
2.2

    2.灵敏度 该检测的灵敏度由参考曲线的下限确定，所以每批试剂的检测下限略有不同，IgM灵敏度一般在＜0.2g/L左右。
    3.干扰 样本中的混浊和颗粒会干扰测定。由不完全凝血或蛋白变性造成的颗粒，必须在检测前通过离心去除。高度脂血样本必须通过离心（大约15 000×g离心10分钟）进行澄清。胆红素达到600mg/L、甘油三酸酯达到4.6g/L和游离血红蛋白浓度为10g/L时不会干扰检测（±20%）。脂血标本可通过高速离心（15 000rpm×15min）后取下层清亮标本测定。
    【参考范围】
    本实验室：血清IgM：0.6~2.5g/L。
    【临床意义】
    1.类风湿因子（RF）是与个体自身免疫球蛋白反应的抗体。抗体分子通常引导与IgG分子的Fc区域结合。约70%~90%的类风湿性关节炎（RA）患者RF为阳性，但RF阴性不能排除RA诊断。对于具有RF较高浓度的患者的诊断和预后具有重要意义，这些患者会发展出更加严重的疾病形式，并更容易出现关节外的并发症。
    2.除RA外，还有其他很多疾病RF亦可阳性，如干燥综合征，混合性结缔组织病，2型混合性冷球蛋白血症，慢性活动性肝炎，亚急性细菌性心内膜炎，全身性红斑狼疮，多种细菌、真菌、螺旋体、寄生虫、病毒感染。因此，RF阳性时应结合临床全面检查，对其意义作出综合分析。
    3.健康人群中约有5%的人RF阳性。随着年龄的增加，RF的检出率会增加。70岁以上的人阳性率甚至高达10%~25%，但临床意义不太明确。有人认为，RF常先于临床症状的出现而呈阳性，这些人患RA的风险较RF阴性人群要高5~40倍。
    【标本要求】
    1.空腹采集静脉血3ml，建议使用血清样本，血浆样本（肝素锂和肝素钠）也可以使用。不能使用EDTA作为抗凝剂的样本。
    2.采集后两小时内离心分离血清或血浆。血清样本常温稳定8小时，2~8℃稳定7天。不建议使用冷冻样本，如果血清样本重复冻融，其中的分析物会发生变化。
    3.血浆样本可以在2~8℃储存至72小时，血浆样本不能冷冻。
    【方法与原理】
    1.方法 免疫散射比浊法。
    2.原理 包被有人γ球蛋白/羊抗人γ球蛋白的抗原抗体复合物的聚苯乙烯颗粒与带有RF的样本混合在一起时会发生凝集。在散射比浊仪中造成的散射光强度取决于样本中RF的含量，因此，通过与已知浓度的标准品进行比较，就可以确定某个样本中RF的含量。
    【仪器】
    Siemens BNⅡ全自动蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Siemens公司。
    2.试剂
    （1） RF试剂：由液体的聚苯乙烯颗粒混悬液组成，上面包被有人γ球蛋白/羊抗人γ球蛋白的抗原抗体复合物，即人和动物γ球蛋白的组合。当按照说明将试剂进行复温后，聚苯乙烯颗粒的浓度已经优化可用来进行免疫散射比浊法凝集测定。在每天每次使用前，应该小心地混匀该试剂。
    （2） RF辅助试剂：RF辅助试剂由含有去垢剂的聚乙烯乙二醇溶液（最多70g/L）组成。
    3.试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，如果每次使用后立即密封保存在2~8℃条件下，试剂可以使用10天；上机可稳定5天（每天8小时）或相当于此的时间长度（最多40小时）。
    4.质控品 Siemens公司提供的N/T类风湿质控品SL1/2，货号OODB/OODC。
    5.校准品 Siemens公司提供的N风湿病学标准品SL，货号OQKZ。
    【项目校准】
    1.仪器会自动用稀释剂准备以下稀释度的类风湿标准品 SL：1：5、1：10、1：20、1： 40、1： 80、1：160及1： 320。该标准品稀释液应该在4小时内使用。
    2.参考曲线的有效期为10天。超过这个期限后，只要两个准确性质控，例如N/T类风湿质控SL/1和2，其重现值在相应的置信区间内，则该曲线就可以继续使用。然而，对每一个新批次的试剂，都应该建立新的参考曲线。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    4.维护保养后如更换光源、清洁光路及更换主要部件后应进行项目校准。
    【性能参数】
    1.精密度（厂家） 使用NRF试剂盒在BNTM系统上检测血清可得到以下变异系数（CV）：

检测内（n＝20）
浓度IU/mlCV（%）
检测间（n=10）
浓度IU/mlCV（%）
52
201
510
4.2~6.1
4.2~6.1
4.2~6.1
92
155
306
9.3
6.2
6.6

    2.检测范围 N乳胶RF试剂盒设计为使用1： 20的样本稀释度，在10~600IU/ml的测定范围内测定RF浓度，超过该范围仪器自动用1：100的样本稀释度重新进行检测。
    3.干扰 样本中的混浊和颗粒会干扰测定。由不完全凝血或蛋白变性造成的颗粒，必须在检测前通过离心去除。脂血标本可通过高速离心（15000rpm×15min）后取下层清亮标本测定。补体因子和血红蛋白浓度高达2g/L的溶血样本不会干扰检测。
    【参考范围】
    0~15.0IU/ml。
    【临床意义】
    免疫球蛋白分子的轻链分两型：KAP型和LAM型，KAP/LAM约为2：1。多发性骨髓瘤（MM）患者血清中出现的异常M蛋白，由于是单克隆恶性增生，所以只为单一型轻链增多，即KAP增多或LAM增多，故测定血或尿中的轻链对MM的诊断、分型及病情监测有重要意义。如患者血或尿中出现单一型轻链异常增多，而另一型往往减少，破坏了轻链比值的平衡，则应高度怀疑MM的可能。
    自身免疫性疾病、感染、肿瘤、急慢性肝炎、肝硬化等血中轻链也可增多，但一般均表现为KAP、LAM同时增多；肾病、自身免疫病、糖尿病等患者由于肾损伤，尿中也可出现KAP、LAM同时增多。
    【标本要求】
    1.建议使用血清和尿液样本。
    2.空腹采集静脉血3ml，采集后两小时内离心分离血清。血清样本常温稳定8小时，2~8℃稳定72小时，超过72小时未测定应在-20℃冷冻保存。冷冻样本只能融化一次，如果重复冻融，样本中的分析物会发生变化。
    3.尿液样本收集时不能加入防腐剂，污染有血液的样本不能使用。在分析前将尿液样本在3000×g离心10分钟以去除细胞和其他碎片。尿液样本可以在2~8℃条件下储存72小时，冷冻样本不得使用。
    【方法与原理】
    1.方法 采用速率散射比浊法对人血清和尿液中的kappa轻链或lambda轻链（包括结合和游离）进行定量分析。
    2.原理 试剂中的羊抗人kappa（或lambda）轻链抗体和待测样本中的kappa（或lambda）形成抗原抗体复合物，悬浮在缓冲液中使散射光信号发生变化，通过测定信号增长的速率决定抗原浓度。
    【仪器】
    Beckman Coulter公司IMMAGE 800全自动特定蛋白分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter公司。
    2.试剂盒
    （1） KAP试剂：羊抗人kappa轻链抗血清3.9ml；抗原过量检测溶液（AGXS）1.2ml。
    （2） LAM试剂：羊抗人lambda轻链抗血清3.9ml；抗原过量检测溶液（AGXS）3.9ml。
    3.试剂稳定性 每天的工作完成后，将试剂盒放回到冰箱中（2~8℃）。使用防蒸发盖的情况下，轻链试剂可以在机上稳定30天。
    4.缓冲液1和稀释液1 使用防蒸发盖，在系统上可以稳定30天。
    5.校准品 Beckman公司定标液1（P/N449560），密闭保存在原装容器内，储存条件2~8℃，可以一直稳定到瓶上所示有效期。
    6.质控品 Beckman Coulter公司配套定值质控品，正常值和异常值两个水平。PROT CTL LEVl（450120）； PROT CTL LEV3（450130）.
    【参数设置】
    ↑反应杯中样本和试剂的起始用量

KAP测定
血清
尿液
样本量
总试剂量
抗体
缓冲液1
稀释液1
0.11μl
344.89μ1
21.00μl
300.00μl
23.89μl
24μ1
321μl
21μl
300μl
LAM测定
血清
尿液
样本量
总试剂量
抗体
缓冲液1
稀释液1
0.58μl
341.42μl
21.00μl
300.00μl
20.42μl
21μl
321μl
21μ1
300μl

    【项目校准】
    IMMAGE免疫化学系统的定标是批特异性的。试剂出厂时采用多点定标，用户操作时使用单点确认，进行截距的调整。
    1.更换试剂批号或缓冲液1的批号后应校准。
    2.更换特定部件时（如光源、比色杯）和保养程序后，试剂应重新定标。
    3.质控失控后，在排除其他影响因素后，质控结果仍不满意的，应重新定标。
    4.KAP/LAM定标稳定期为30天。
    【性能参数】
    1.分析范围
    （1） KAP检测使用起始血清样本稀释度1： 216，起始原倍尿液样本进行浓度测定。

样本类型
BeckmanCoulter分析范围
血清
尿液
起始范围：400~4400mg/dl
扩大范围：11.1~26400mg/dl
起始范围：1.85~20.4mg/dl
扩大范围：1.85~26400mg/dl

    （2） LAM检测使用起始血清样本稀释度1：36，起始原倍尿液样本进行浓度测定。
    Beckman Coulter分析范围
    起始范围：180~1400mg/dl
    扩大范围：30~25 200mg/dl
    起始范围：5.0~38.9mg/dl
    扩大范围：5.0~8400mg/dl
    2.精密度 IMMAGE免疫化学系统评估的比较性能数据使用NCCLS建议的EP5-T2方案，结果见表1-10。
    表1-10 血清轻链的精密度评估结果

KAP精密度
样本
数据点
检测平均值（mg/dl）
SD（mg/dl）
%CV
血清水平1
80
540
15.6
2.9
批内
血清水平2
80
1113
24.1
2.2
血清水平3
80
2377
61.2
2.6
总
血清水平1
80
540
17.4
3.2
血清水平2
80
1113
30.9
2.8
血清水平3
80
2377
70.9
3.0
LAM精密度
样本
数据点
检测平均值（mg/dl）
SD（mg/dl）
% CV
血清水平1
80
247
5.1
2.1
批内
血清水平2
80
718
14.0
1.9
血清水平3
80
1233
37.2
3.0
总
血清水平1
80
247
5.3
2.2
血清水平2
80
718
17.4
2.4
血清水平3
80
1233
39.7
3.2

    3.干扰
    （1）在起始样本稀释度下，检测了以下物质在血清中对使用该方法学进行轻链检测的干扰：

物质
来源
检测的水平
观察结果
胆红素
脂类
血红蛋白
猪
人甘油三酯
人
5~30mg/dl
200~1000mg/dl
100~500mg/dl
无
无+
无

使用浊度法进行特种蛋白的定量测定可能不宜应用于脂血样本，因为该样本具有强烈的光发散
    特性
    （2）当机外的分析稀释度低于1： 36时，在较低稀释度的血清样本和使用多聚物增强剂的缓冲液之间会发生非特异性反应。
    【参考范围】
    本实验室：血清：KAP 598~1329mg/dl LAM 298~665mg/dl。
    尿液：KAP 0~5.1mg/dl    LAM 0~5.0mg/dl。
    【临床意义】
    AFP的临床价值是用于高危人群（肝硬化、HBsAg携带者、睾丸肿胀）中诊断原发性肝癌和胚胎细胞肿瘤，其主要意义是对有原发性肝细胞癌和胚胎细胞肿瘤高风险的人群进行监测，但并不适用于肿瘤的筛查。
    1.生理情况 小于1岁的儿童，妊娠妇女，升高程度与孕期有关，从孕期第10周起升高，32~36周血清AFP水平达峰值，随后下降直至分娩。AFP还可用于妊娠监测，孕妇血清或羊水中如有AFP异常升高，提示胎儿有脊柱裂、无脑儿、食道闭锁等先天畸形的可能，应尽早诊治。
    2.良性疾病 肝硬化、急性病毒性肝炎、慢性活动性肝炎患者AFP可升高，但一般不超过500ng/ml。
    3.恶性肿瘤 升高见于原发性肝癌，AFP阳性率可达70%~90%，诊断标准为AFP＞500ng/ml，持续1个月以上，可结合临床确诊肝癌。但也有15%~20%的患者AFP可在正常范围，故AFP正常并不能排除肝癌的可能。AFP测定值与肿瘤大小、合成速度、分期及恶性程度有一定关系。其他恶性肿瘤如胚胎细胞瘤、卵巢畸胎瘤、胃癌、胆道癌、结直肠癌、胰腺癌和肺癌等患者AFP也可有不同程度的升高，并常伴有肝转移。
    检测系统l：Roche
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清或肝素钠、EDTA抗凝血浆），不能用枸橼酸钠作为抗凝剂，其他样本：胸腔渗出液、脑脊液、腹水、羊水。
    2.全血室温稳定24小时，血清或血浆2~8℃稳定7天，-20℃（-20℃以下）可稳定3个月。
    3.建议空腹抽取静脉血，避免溶血、污染。为防止蒸发，样本应该在2小时内完成测定。
    【方法与原理】
    1.方法 电化学发光（双抗体夹心法）。
    2.原理
    第一步：生物素标记的AFP特异性单克隆抗体和钌复合物标记的AFP特异性抗体及待测标本（含抗原），形成抗原双抗体夹心复合物（图1-9）。
   
    第二步：加入链霉亲和素包被的磁性微粒，上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上（图1-10）。
   
    第三步：反应混合液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极表面上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生电化学发光，发出的光被光电倍增管收集，测定光强度。通过换算得出待测标本中的抗原浓度。
    【仪器】
    Roche cobas e601全自动免疫分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商Roche。
    2.试剂包组成：M：链霉亲和素包被的磁性微粒。R1：生物素标记的抗AFP特异性单克隆抗体。R2：钌标记的抗AFP特异性单克隆抗体（鼠单克隆抗体）、磷酸盐缓冲液。
    3.ProCell含TPA的缓冲液。
    4.CleanCell 洗液。
    5.试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，开盖后2~8℃可稳定12周。储放于仪器试剂盘可保存8周。
    6.校准品 Roche Call、Ca12。靶值参见不同批号说明书。不同批号校准品含有不同的校准条码标签，内包含校准需要的信息。
    7.质控品 Roche Elecsys质控血清，TM1、TM2两个水平。
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后，必须校准。
    2.相同批号的试剂使用28天后，必须校准。
    3.同一批号的同一盒试剂在仪器上使用7天后，必须校准。
    4.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    5.特殊情况校准要求参见仪器操作维护手册。
    【性能参数】
    1.精密度

E170
批内精密度
总精密度
样本
中位数（ng/ml）
SD（ng/ml）
CV%
中位数（ng/ml）
SD（ng/ml）
CV%
人血清1
14.8
17.8
0.27
0.33
1.8
14.1
17.0
0.53
0.64
3.8
人血清2
46.7
56.5
0.65
0.79
1.4
44.6
53.9
1.14
1.38
2.6
人血清3
745
901
11.7
14.2
1.6
711
860
23.4
28.3
3.3
质控TM1
9.35
11.3
0.21
0.25
2.2
9.1
11.0
0.26
0.31
2.8
质控TM2
104
126
2.49
3.01
2.4
103
125
2.54
3.07
2.5

    2.检测范围 血清和血浆样本为0.605~1210ng/ml，当样本浓度超过检测范围上限时，样本由仪器自动稀释50倍后重新测定。
    3.干扰 以下几种情况对检测值无显著影响
    胆红素＜66mg/dl
    血红蛋白＜2.2g/dl
    甘油三酯＜1500mg/dl
    生物素（维生素H）＜120ng/ml，高浓度生物素制剂治疗的患者必须在停药8小时后再采血样进行检测。
    AFP浓度＜100 000ng/ml时不会因“钩状效应”对检测结果造成影响。
    注：患者经干细胞抽提、新鲜细胞治疗或经单克隆抗体（鼠）注射后，可因合成直接针对外来抗原的抗体而引起交叉反应，从而产生AFP假阳性结果。
    检测系统2：Abbott ARCHITECT
    【方法与原理】
    1.方法 化学发光微粒子免疫分析法（Chemiluminescent MicroparticleImmunoassay，CMIA）。
    2.原理
    第一步：标本与微粒以一定比例混合，标本中被检物质与微粒上包被的抗体孵育一段时间后，抗原与抗体形成复合物。未反应的被检物质与其他的成分在孵育结束后利用磁场分离（图1-11）。
   
    第二步：该复合物与吖啶酯标记的连接物反应形成双抗体夹心抗原抗体复合物。吖啶酯在过氧化氢的稀碱溶液中发生氧化还原反应生成10-甲基吖啶酮（图1-12）。
   
    第三步：当10-甲基吖啶酮恢复到基态时发光，根据发光强度可计算出分析物的浓度（图1-13）。
   
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血2.5ml（血清或肝素锂抗凝血浆）以及15~21个星期孕期的羊水。
    2.血浆/血清2~8℃稳定7天，-20℃或更低温度下稳定更久。
    3.应该避免溶血、污染，并尽快分离血清。离心前，必须确保血清样品已经彻底凝集，否则纤维的存在会导致结果错误。如果羊水被胎儿血液污染会造成AFP异常升高。
    【仪器】
    Abbott ARCHITECT全自动免疫分析仪。
    【试剂】
    1.厂家Abbott。
    2.AFP试剂盒 鼠单克隆抗AFP抗体包被的磁性微粒、吖啶酯标记的鼠单克隆抗AFP抗体结合物、含TRIS的稀释液。试剂稳定性：未开盖试剂2~8℃保存至效期，开盖后2~8℃可稳定28天。
    3.其他试剂 洗液、激发液、预激发液等。
    4.校准品 由Abbott公司提供的AFP校准品。Call和Ca12两水平，靶值参见不同批号说明书。
    5.质控品 由Abbott公司提供的低、中、高三个水平配套质控品。
    【项目校准】
    1.试剂更换批号后，必须校准。
    2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    3.校准参数改变后，需重新校准。
    4.特殊情况校准要求参见仪器操作维护手册。
    【性能参数】
    1.精密度

样品
实验室
AFP平均值
（ng/ml）
批内运行
标准差%变异系数
总
标准差%变异系数
低值质控品
1
2
3
25.170
24.876
23.400
1.080
0.875
0.941
4.3
3.5
4.0
1.264
0.977
0.975
5.0
3.9
4.2
中值质控品
1
2
3
87.35
84.27
76.86
4.637
3.775
3.340
5.3
4.5
4.3
5.103
3.839
3.967
5.8
4.6
5.2
高值质控品
1
2
3
202.90
195.14
182.59
6.588
4.967
6.634
3.2
2.5
3.6
7.337
5.893
6.675
3.6
3.0
3.7

    2.检测范围 0~1750ng/ml，当样本浓度超过检测范围上限时，对于血清或血浆标本可用仪器自动稀释10倍，羊水标本仪器可自动稀释50倍后重新测定。其他稀释倍数则需手工稀释。一般稀释20倍（50μl样本加入950μl样本稀释液）或101倍（10μl样本加入1ml样本稀释液）。
    3.干扰 以下几种情况对检测值的影响不超过10%：胆红素＜3mg/dl；血色素＜700mg/dl；总蛋白＜5.0g/dl；甘油三酸酯＜136mg/dl。
    “钩状效应”的影响：AFP浓度＜1 875 000ng/ml时，不会因“钩状效应”对检测结果造成影响。
    【参考值】
    0~20ng/ml。
    【临床意义】
    CA125升高主要用于卵巢癌的检测，对卵巢上皮性癌的阳性率大于80%。其升高还见于子宫颈癌、子宫内膜癌、输卵管癌等。其他非妇科的恶性肿瘤如胰腺癌、肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等的阳性率约为22%。某些非恶性肿瘤也可见CA125高于正常，如女性盆腔炎、子宫肌瘤、慢性肝炎、胰腺炎等，故CA125检查对大部分患者不能作为直接诊断依据，但其浓度可用于疗效观察和判断预后，CA125水平下降表明预后良好，若肿瘤复发，CA125的升高要早于其他临床指征。
    1.血清CA125检查可用于监测浸润型上皮卵巢癌的病程。在9个有关的研究中，87%的报告发现，血清CA125水平与疾病过程相关。CA125值持续升高与恶性肿瘤存在和对治疗反应欠佳相关。而CA125值的降低，提示对治疗反应较好。在接受过第一线治疗和准备做诊断性剖腹探查术的原发性上皮型卵巢癌患者，CA125值高于或等于35U/ml，提示有肿瘤残存。但是，CA125值低于35U/ml，不表示无卵巢癌残存，这是因为有些患者的组织病理学检查证实有卵巢癌，而其CA125值仍在正常范围。
    2.升高的CA125可见于1%~2%的健康者和某些非恶性肿瘤疾病，如肝硬化、肝炎、子宫内膜异位症、妊娠前3个月、卵巢囊肿和盆腔感染性疾病。在月经周期CA125值也可增高。有报道CA125值升高也可见于卵巢外的其他恶性肿瘤，如：子宫颈、肝、胰腺、肺、结肠、胃、胆道、子宫、输卵管、乳腺及子宫内膜的癌症，CA125不被推荐作为在一般人群中筛查癌症的项目。但其结果有助于对卵巢癌患者治疗的指导。
    检测系统1：Roche
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清或肝素钠、EDTA抗凝血浆），不能用枸橼酸钠作为抗凝剂，其他样本：胸腔渗出液、脑脊液、腹水。
    2.全血室温稳定24小时，血清或血浆2~8℃稳定7天，-20℃（-20℃以下）可稳定3个月。
    3.建议空腹抽取静脉血，避免溶血、污染。为防止蒸发，样本应该在2小时内完成测定。
    【方法与原理】
    1.方法 电化学发光（双抗体夹心法）。
    2.原理
    第一步：生物素标记的CA125特异性单克隆抗体和钌复合物标记的CA125特异性抗体及待测标本（含抗原），形成抗原双抗体夹心复合物（参见图1-9）。
    第二步：加入链霉亲和素包被的磁性微粒，上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上（参见图1-10）。
    第三步：反应混合液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极表面上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生电化学发光，发出的光被光电倍增管收集，测定光强度。通过换算得出待测标本中的抗原浓度。
    【仪器】
    Roche cobas e601全自动免疫分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商Roche。
    2.试剂包组成：M：链霉亲和素包被的磁性微粒。R1：生物素标记的抗CA125特异性单克隆抗体。R2：钌标记的抗CA125特异性单克隆抗体（鼠单克隆抗体）、磷酸盐缓冲液。
    3.ProCell 含TPA的缓冲液。
    4.CleanCell 洗液。
    5.试剂稳定性未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，开盖后2~8℃可稳定12周。储放于仪器试剂盘可保存8周。
    6.校准品 Roche Call、Ca12。靶值参见不同批号说明书。不同批号校准品含有不同的校准条码标签，内包含校准需要的信息。
    7.质控品Roche Elecsys质控血清，TM1、TM2两个水平。
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后，必须校准。
    2.相同批号的试剂使用28天后，必须校准。
    3.同一批号的同一盒试剂在仪器上使用7天后，必须校准。
    4.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    5.特殊情况校准要求参见仪器操作维护手册。
    【性能参数】
    1.精密度

E170
批内精密度
总精密度
样本
MeanU/ml
SDU/ml
CV%
MeanU/m
SDU/ml
CV%
人血清1
21.1
0.23
1.1
20.1
0.37
1.8
人血清2
198
1.39
0.7
199
3.43
1.7
人血清3
1816
29.3
1.6
1786
45，4
2.5
质控TM1
51.1
0.48
0.9
50.1
0.78
1.6
质控TM2
115
1.23
1.1
116
1.68
1.5

    2.检测范围 血清和血浆样本为0.6~5000U/ml，当样本浓度超过检测范围上限时，样本由仪器自动稀释5倍后重新测定。
    3.干扰 以下几种情况对检测值无显著影响
    胆红素＜66mg/dl
    血红蛋白＜2.2g/L
    甘油三酯＜1000mg/dl
    生物素（维生素H）＜100ng/ml，高浓度生物素制剂治疗的患者必须在停药8小时后再采血样进行检测。
    CA125浓度＜50 000U/ml时不会因“钩状效应”对检测结果造成影响。
    注：患者经干细胞抽提、新鲜细胞治疗或经单克隆抗体（鼠）注射后，可因合成直接针对外来抗原的抗体而引起交叉反应，从而产生CA125假阳性结果。
    检测系统2：Abbott ARCHITECT
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血2.5ml（血清、肝素钠、肝素锂抗凝的血浆）。
    2.血浆/血清2~8℃稳定7天，-20℃或更低温度下稳定更久。
    3.应该避免溶血、污染，并尽快分离血清。离心前，必须确保血清样品已经彻底凝集，否则纤维的存在会导致结果错误。
    【方法与原理】
    1.方法 化学发光微粒子免疫分析法（Chemiluminescent Microparticle Immu-noassay，CMIA）。
    2.原理
    第一步：标本与微粒以一定比例混合，标本中被检物质与微粒上包被的抗体孵育一段时间后，抗原与抗体形成复合物。未反应的被检物质与其他的成分在孵育结束后利用磁场分离（参见图1-11）。
    第二步：该复合物与吖啶酯标记的连接物反应形成双抗体夹心抗原抗体复合物。吖啶酯在过氧化氢的稀碱溶液中发生氧化还原反应生成10-甲基吖啶酮（参见图1-12）。
    第三步：当10-甲基吖啶酮恢复到基态时发光，根据发光强度可计算出分析物的浓度（参见图1-13）。
    【仪器】
    Abbott ARCHITECT全自动免疫分析仪。
    【试剂】
    1.厂家 Abbott。
    2.CA125试剂盒，包括：鼠单克隆抗CA125抗体包被的磁性微粒、吖啶酯标记的鼠单克隆抗CA125抗体结合物、含TRIS的稀释液。
    3.试剂的稳定性未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，开盖后2~8℃可稳定30天。
    4.其他试剂洗液、激发液、预激发液等。
    5.校准品 由Abbott公司提供的CA125校准品。CalA、CalB、CalC、CalD、CalE和CalF六个水平，靶值参见不同批号说明书。
    6.质控品 由Abbott公司提供的低、中、高三个水平配套质控品。
    【项目校准】
    1.试剂更换批号后，必须校准。
    2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    3.校准参数改变后，需重新校准。
    4.特殊情况校准要求参见仪器操作维护手册。
    【性能参数】
    1.精密度
    2.检测范围血清和血浆样本为0~1000U/ml，当样本浓度超过检测范围上限时，可仪器自动稀释10倍或手工稀释10倍（50μl样本加入450）μl样本稀释液）后重新测定。
    3.干扰 以下几种情况对检测值无显著影响：胆红素＜20mg/dl，血红蛋白＜500mg/dl，甘油三酯＜3g/dl，总蛋白＜12g/dl。
    4.“钩状效应”的影响CA125浓度<180 000U/ml时，不会因“钩状效应”对检测结果造成影响。
    5.方法局限性 曾接受过鼠单克隆抗体制剂治疗和诊断者，血清、血浆中可能含有人抗鼠单克隆抗体。这样的样本可对使用鼠单克隆抗体的检测项目引起假性升高或降低。需更多的其他诊断检查或临床症状对患者状况进行正确评价。
    【参考值】
    ＜35U/ml。

 



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