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【医技】检验科医疗诊疗规范——第一篇 临床化学与免疫检验51-60

作者:王泓 日期:2014-06-19

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    【临床意义】
    血中CK-MB mass升高可见于：
    1.心肌梗死 胸痛发作后4~8小时开始升高，12~24小时达到最高峰值，48~72小时恢复正常。连续测定CK-MB，进行动态监测，用于心肌梗死的诊断以及疗效观察。
    2.心绞痛 伴有CK-MB mass增加的不稳定心绞痛患者数月后心肌梗死的发生和死亡都明显高于CK-MB mass正常的不稳定心绞痛。
    3.骨骼肌损伤、外伤、剧烈锻炼时，CK-MB mass水平也可升高。
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清或肝素锂抗凝血浆）。
    2.血清或血浆标本室温下可稳定12小时，2~8℃稳定3天，-20℃稳定1个月。
    检测系统1：Beckman Coulter UniCel
    【方法与原理】
    1.方法 化学发光。
    2.原理 标本、标记碱性磷酸酶的大鼠抗人CK-MB抗体（酶结合物）以及包被了大鼠抗CK-BB抗体的磁性颗粒一起加入到反应管中，标本中的CK-MB和固相在磁性颗粒表面的CK-BB抗体的B亚单位（与CK-BB和CK-MB为同分异构体）进行反应，同时酶结合物与血清或血浆中的CK-MB相结合（不与CK-BB和CK-MB同分异构体反应）。孵育后，反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去除未和固相结合的其他成分。最后在反应管中如入化学发光底物（Lumi-Phos* 530），碱性磷酸酶使底物发出光子并被光电比色计所检测。最后，对照仪器中储存的多点校准曲线中光量子与标准品CK-MB的对应关系而计算出标本中的CK-MB浓度，反应产生的光子与标本中CK-MB的含量成正比。
    【仪器】
    Beckman Coulter UniCel iclass系列生化免疫分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter。
    2.R1 Access CK-MB试剂盒，包括：①Rla：包被了大鼠抗人CK-BB的单克隆抗体的磁性颗粒悬浮于Tris缓冲液中，还含小牛血清白蛋白（BSA）、＜0.1%的叠氮钠和0.1% ProClin*300。②Rlb：大鼠抗人CK-MB单抗一碱性磷酸酶结合物包含于Tris缓冲盐中，还含小牛血清白蛋白（BSA）、＜0.1%的叠氮钠和0.1% ProClin 300。③R1c：纯化的大鼠IgG包含于PBS缓冲液中，含＜0.1%的叠氮钠。
    3.试剂稳定性 2~8℃冰箱中顶端朝上存放，可一直保存到标签中注明的失效期。试剂盒开封后，在2~8℃可稳定28天，一旦发现有试剂盒上弹性体破裂或质控结果超出范围等（排除其他原因）现象出现即代表试剂盒失效。
    4.Access底物：Lumi-Phos 530。未开瓶时，2~8℃保存到标签注明的失效期。未开瓶使用前在室温至少放置18小时，开瓶后在仪器上最长放置14天。
    5.冲洗缓冲液 Tris盐缓冲液、离子表面活性剂、＜0.1%的叠氮钠和0.1% ProClin 300。在室温条件下可稳定到包装上注明的失效期。
    6.CK-MB稀释液以小牛血清白蛋白（BSA）为基质的缓冲液，使用前在室温条件下轻轻颠倒混匀，避免产生气泡。2~8℃环境下保存可稳定到瓶上标签标出的失效期。开瓶后在2~8℃环境下可稳定3个月。
    7.质控品 Bio-Rad公司Cardiac Markers Plus Control，181、182及183三个水平。
    8.校准品 Beckman Coulter CK-MB含有6个浓度水平的液态校准品，0.Oμg/L、0.03μg/L、10μg/L、30μg/L、100μg/L以及300μg/L。
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后，应校准。
    2.定期校准，同一批号试剂每56天校准一次。
    3.维护保养后如更换光源、清洁光路及仪器后光电校正、更换管路应校准。
    4.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    【性能参数】
    1.精密度

样本
均值（n＝40）     μg/L
总SDμg/L
批内（%CV）
批间（%CV）
总不精密度   （%CV）
三级质控品1
6.6
0.2
2.32
2.21
3.21
三级质控品2
31.4
1.1
2.08
2.87
3.54
三级质控品3
88，2
2.3
2.21
1.47
2.66
质控品A
4.5
0.1
2.17
1.55
2.67
质控品B
7.7
0.2
1.88
2.46
3.10
质控品C
24.4
0.8
2.13
2.53
3.30
质控品D
74.2
2.0
2.04
1.80
2.72
质控品E
172.3
5.4
1.15
2.89
3.11

    2.检测范围 0~300μg/L。若样品中CK-MB含量大于300μg/L，可用生理盐水稀释2~20倍后重新测定，结果乘以稀释倍数。
    3.干扰 当CK-MB在5.0μg/L水平时，以下几种情况对检测值无显著影响（＜10%）
    胆红素    ≤1710μmol/L
    血红蛋白 ≤5.0g/L
    甘油三酯 ≤33.9mmol/L
    【参考范围】
    本实验室：0.6~6.3μg/L。
    检测系统2：Siemens Dimension
    【方法与原理】
    1.方法 非均相免疫法。
    2.原理
    CKMB+CrO2-Ab-CKMB-F（ab’）2-
    CrO2-Ab+→β-gal+CrO2-Ab+
    F（ab’）2-β-吡喃半乳糖苷    F（ab’）2-β-吡喃半乳糖苷
   
    上述反应中CPR577nm处吸光度变化与样品中CK-MB mass的含量成正比。
    【仪器】
    Siemens Dimension系列自动生化分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Siemens。
    2.试剂船1、2孔为液体的结合物（β-吡喃半乳糖苷）；3、4孔为CrO2-Ab药片：1.8mg/ml；5、6孔为氯酚红-β-d-吡喃半乳糖苷（CPRG）：15.7mmol/L；7孔为底物稀释缓冲液：175mmol/L，8孔为色原稀释缓冲液：200mmol/L。
    3.未开封试剂盒2~8℃保存可稳定至效期；在仪器中，未打孔或未水化试剂稳定30天；4、5、6孔打孔后稳定5天，1、3、7孔打孔后稳定10天。
    4.质控品 Bio-Rad公司Cardiac Markers Plus Control，181、182及183三个水平。
    5.校准品 Siemens MMB校准品（Cat.No.RC420），靶值参见不同批号说明书。
    【参数设置】
    1.Sample vol：60μl
    2.Reagent 1 vol：50μl
    3.Reagent 2 vol：50μl
    4.Wavelength Pri：577nm Sec：700nm
    5.Method：rate
    6.Dynamic range：0~300
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后需校准；同一批号试剂使用60天后需校准。
    2.维护保养如更换光源、清洗比色杯、清洁光路、更换管路等之后需校准。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意，需重新校准。
    【性能参数】
    1.精密度

    浓度（μg/L）
批内
总
SD（μg/L）
CV%
SD（μg/L）
CV%
水平1
1.27
0.29
23.0
0.29
23.0
水平2
7.76
0.27
3.5
0.69
8.8
水平3
13.07
0.32
2.4
0.57
4.4

    2.检测范围0~300μg/L。若样品中CK-MB含量大于300μg/L，可用生理盐水稀释2~20倍后重新测定，结果乘以稀释倍数。
    3.干扰 当CK-MB在5.Ong/ml水平时，以下几种情况对检测值无显著影响（＜10%）
    胆红素    ≤1026μmol/L
    血红蛋白 ≤10g/L
    甘油三酯 ≤16.93mmol/l。（高脂样本超过反应允许吸光度，仪器报警
    “abnormal reaction”，这时应15 000转高速离心15分钟后，取
    下层清亮液体测定。）
    【参考范围】
    本实验室：0.00~3.6μg/L。
    【临床意义】
    cTnl是心肌损伤最特异的标志物，血中cTnI升高可见于：
    1.急性心肌梗死 血清cTnI具有高度的心肌特异性，连续测定可进行动态监测，用于急性心肌梗死的诊断以及疗效观察。血清cTnl在急性心肌梗死发作3~6小时开始升高，12~20小时达最高峰值（受梗阻冠脉再灌注的影响，可有所不同）5~10天可恢复正常。急性心肌梗死发作后，cTnI出现时间和CK-MB相当或稍早，但持续时间较长，适合出现急性心肌梗死症状没有立即就诊的患者。主诉胸痛的患者若血清cTnl结果位于参考值上限和急性心肌梗死决定水平之间，应考虑“心肌损伤”。
    2.部分不稳定心绞痛患者。
    3.围术期心肌损伤，心肌炎，心脏创伤。
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清或肝素锂抗凝血浆）。
    2.血清或血浆标本室温下可稳定8小时，2~8℃稳定2天，-20℃稳定6个月。
    3.避免标本溶血。
    检测系统l：Beckman Coulter UniCel iclass
    【方法与原理】
    1.方法 化学发光。
    2.原理 样品、标记了碱性磷酸酶的抗cTnI单抗（酶结合物）以及包被了抗cTnI另一位点单抗磁性颗粒一起加入到反应管中，样品中的cTnI和固相在磁性颗粒表面的抗体以及游离的酶结合物在不同的抗原位点上同时发生反应。然后反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去除未和固相结合的成分。最后在反应管中加入化学发光底物（Lumi-Phos* 530），碱性磷酸酶会使该底物发出光子并被光电比色计所检测。最后，对照仪器中储存的多点校准曲线中的光量值与校准品cTnI的对应关系而计算出样品中的cTnI浓度，反应产生的光子与样品中cTnI的含量成正比。
    【仪器】
    Beckman Coulter UniCel iclass系列生化免疫分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter。
    2.试剂 Access AccuTnl试剂盒：①Rla：包被了大鼠抗心肌钙蛋白I（cTnI）单抗的磁性颗粒悬浮于Tris盐缓冲液中，含有离子表面活性剂、牛血清白蛋白（BSA）、＜0.1%的叠氮钠和0.1% ProClin**300。②Rlb： 0.1 mol/L NaOH。③R1c：标记了碱性磷酸酶的大鼠抗心肌肌钙蛋白I（cTnl）单抗作为酶结合物保存于ACES缓冲液中，其中包括有离子表面活性剂、牛血清白蛋白（BSA）基质、蛋白（羊、兔、大鼠蛋白）、＜0.1%的叠氮钠和0.25%ProClin**300。
    3.试剂稳定性2~8℃冰箱中顶端朝上存放，可一直保存到标签中注明的失效期。试剂盒开封后，在2~8℃可稳定56天。
    4.Access底物Lumi-Phos 530。未开瓶时，2~8℃保存到标签注明的失效期。未开瓶使用前在室温至少放置18小时，开瓶后在仪器上最长放置14天。
    5.冲洗缓冲液 Tris盐缓冲液、离子表面活性剂、＜0.1%的叠氮钠和0.1% ProClin 300。在室温条件下可稳定到包装上注明的失效期。
    6.样品稀释液 含有离子表面活性剂的以小牛血清白蛋白为基质的缓冲液，含＜0.1%的叠氮钠和0.1% ProClin**300。样品稀释液使用前在室温放置10分钟。在2~8℃条件下可稳定到失效期。
    7.质控品 Bio-Rad公司Cardiac Markers Plus Control，181、182及183三个水平。
    8.校准品 Beckman Coulter AccuTnl校准品包含有6个浓度水平，Oμg/L、0.3μg/L、1.2μg/L、5.0μg/L、25μg/L和100μg/L，校准曲线有效期为56天。
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后需校准；同一批号试剂使用56天后需校准。
    2.维护保养如更换光源、清洗比色杯、清洁光路、更换管路等之后需校准。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意需重新校准。
    【性能参数】
    1.精密度

 
样本
平均值（n=120）
（μg/L）
批内（%CV）
批间（%CV）
总不精密度
（%CV）
三级水平质控品1
三级水平质控品2
三级水平质控品3
质控品1（室内）
质控品2（室内）
0.56
7.31
30.55
1.34
0.42
4.03
3.06
3.29
3.42
4.42
2.97
4.12
6.07
2.75
2.71
5.01
5.13
6.90
4.39
5.19

    2.检测范围0.01~100μg/L。若样品中cTnI含量大于100μg/L，可用生理盐水稀释2~20倍后重新测定，结果乘以稀释倍数。
    3.干扰 Bil≤684μmol/L，TG≤11.3mmol/L，Hb≤5.0g/L对cTnI检测值无显著影响（＜10%）。
    【参考范围】
    本实验室：0.00~0.04μg/L。
    【危急报告】
    患者首次检测出现cTnI＞0.5μg/L应及时报告临床。
   
    上述反应的有色产物在510nm处的吸光度变化与cTnl浓度成正比。
    【仪器】
    Siemens Dimension系列自动生化分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Siemens。
    2.试剂 船1~5孔为药片，6~8孔为液体。1孔为黄素腺嘌呤二核苷酸磷酸（FADP）：0.056mg/ml（反应体系浓度，下同），D脯氨酸：38.8mg/ml；2孔为0.23mg/ml的Apo-D-氨基酸氧化酶，0.19mg/ml辣根过氧化物酶，3，5二氯-2-羟基苯磺酸（DCHBS）3.9mg/ml，4-APPl.18mg/ml。5孔为1.6mg/ml的抗体-CrO2，6、7、8孔分别为抗体-ALP，缓冲液与稳定剂，显色物质及稳定剂。
    3.未开封试剂盒2~8℃保存可稳定至效期；在仪器中，未打孔或未水化试剂稳定30天，打孔后稳定3天。
    4.质控品 Bio-Rad公司Cardiac Markers Plus Control，181、182及183三个水平。
    5.校准品 Siemens Cardiac Troponin I校准品（Cat.No.RC421C），靶值参见不同批号说明书。
    【参数设置】
    1.Sample vol： 50μl
    2.Reagent 1 vol：25μl
    3.Reagent 2 vol：40μl
    4.Wavelength Pri：510nm Sec：700nm
    5.Method： rate
    6.Dynamic range：0~40
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后需校准；同一批号试剂使用60天后需校准。
    2.维护保养如更换光源、清洗比色杯、清洁光路、更换管路等之后需校准。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意需重新校准。
    【性能参数】
    1.精密度

    浓度（μg/L）
批内
总
SD（μg/L）
CV%
SD（μg/L）
CV%
水平1
0.35
0.01
2.7
0.03
7.7
水平2
5.28
0.05
1.0
0.22
4.2
水平3
14.52
0.14
1.0
0.71
4.9

    2.检测范围0~40μg/L。若样品中cTnl含量大于40μg/L，可用生理盐水稀释2~20倍后重新测定，结果乘以稀释倍数。
    3.干扰 Bil≤342μmol/L，TG≤33.9mmol/L，Hb≤10g/L对cTnI在1.5μg/L水平时检测值无显著影响（＜10%）。
    【参考范围】
    本实验室：0~0.1μg/L。
    cTnI的正常人参考范围上限为0.1μg/L，0.1~0.6μg/L考虑不稳定心绞痛或微小心肌梗死，cTnI对于急性心肌梗死的诊断界值为0.6~1.5μg/L，0.6μg/L对于急性心肌梗死诊断的敏感性最高，1.5μg/L对于急性心肌梗死诊断的特异性最高。
    【危急报告】
    患者首次检测出现cTnI＞0.5μg/L应及时报告临床。
    【临床意义】
    肌红蛋白升高可见于：
    1.急性心肌梗死 胸痛2~4小时升高，6~9小时达峰，24~36小时回正常水平。对急性心肌梗死的阴性预测价值为100%。
    2.重症肌病或严重外伤可显著升高。若检测前怀疑为此类患者，可同时检测原浓度和稀释（常为100倍）各一份，以避免前带效应影响。
    3.其他 偶见于药物或毒素中毒、酒精中毒、发热感染、内分泌紊乱如糖尿病昏迷等。
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清或肝素锂抗凝血浆）。
    2.血清或血浆标本室温下可稳定8小时，2~8℃稳定7天，-20℃稳定28天。
    3.避免标本溶血。
    检测系统1：Beckman Coulter UniCel iclass
    【方法与原理】
    1.方法 化学发光。
    2.原理 标本、标记了碱性磷酸酶的大鼠抗肌红蛋白单抗（酶结合物）、以及包被了大鼠抗肌红蛋白单抗的磁性颗粒一起加入到反应管中，发生抗原抗体反应，形成磁性颗粒一抗体一标本（肌红蛋白）一抗体一碱性磷酸酶，反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去除未和固相结合的其他成分。最后在反应管中加入化学发光底物（Lumi-Phos* 530），碱性磷酸酶会使该底物发出光子并被光电比色计所检测。最后，对照仪器中储存的多点校准曲线中光量子与标准品肌红蛋白的对应关系而计算出标本中的肌红蛋白浓度，反应产生的光子与标本中肌红蛋白的含量成正比。
    【仪器】
    Beckman Coulter UniCel iclass系列生化免疫分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter。
    2.试剂 Access肌红蛋白试剂盒。①Rla：包被了大鼠抗人肌红蛋白单克隆抗体的磁性颗粒悬浮于Tris缓冲液，含离子表面活性剂、小牛血清白蛋白（BSA）、＜0.1%的叠氮钠和0.1% ProClin 300。②R1b：大鼠抗人肌红蛋白单抗-碱性磷酸酶酶结合物包含于Tris缓冲盐中，含小牛血清白蛋白（BSA）、＜0.1%的叠氮钠和＜0.1% ProClin 300。
    3.试剂稳定性 ①2~8℃冰箱中可一直保存到标签中注明的失效期。②试剂盒开封后，在2~8℃条件下可稳定28天。
    4.Access底物 Lumi-Phos 530，未开瓶时2~8℃保存到标签注明的失效期，在冰箱内存放的试剂使用前至少在室温（15~30℃）放置18小时，开瓶在仪器的试剂最长保存14天。
    5.冲洗缓冲液 Tris盐缓冲液，离子表面活性剂，＜0.1%的叠氮钠和0.1% ProClin 300。在室温条件下（15~30℃）可稳定到包装上注明的失效期。
    6.Access肌红蛋白标本稀释液 以小牛血清白蛋白（BSA）为基质的缓冲液。使用前在室温放置10分钟，以便使试剂达到室温。在使用前轻轻的颠倒混匀，但应避免产生气泡。在2~8℃条件下可保存到失效期。开瓶后在2~8℃下可稳定3个月。
    7.质控品 Bio-Rad公司Cardiac Markers Plus Control，181、182及183三个水平。
    8.校准品 Beckman Coulter提供6个浓度的液态校准品，含人肌红蛋白浓度为分别为0.0μg/L、50μg/L、200μg/L、800μg/L、2000μg/L和4000μg/L。
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后需校准；同一批号试剂使用56天后需校准。
    2.维护保养如更换光源、清洗比色杯、清洁光路、更换管路等之后需校准。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意需重新校准。
    【性能参数】
    1.精密度

样本
均值（n=40）
（ng/ml）
总S（ng/ml）
批内%CV）
批间（%CV）
总不精密度
（%cv）
三级质控品1
三级质控品2
三级质控品3
质控品A
质控品B
质控品C
质控品D
质控品E
38.4
148.6
372.2
62.1
175.6
571.8
1707.0
2356.8
1.48
6.67
12.94
2.15
5.28
18.85
56.50
81.17
2.20
1.64
1.80
1.62
1.91
1.58
2.15
2.02
3.23
4.24
2.82
3.08
2.34
2.92
2.54
2.82
3.90
4.54
3.50
3.49
3.03
3.33
3.33
3.47

    2.检测范围 8.9~4000μg/L。若样品中肌红蛋白含量大于4000μg/L，需用生理盐水稀释2~20倍后检测，结果乘以稀释倍数。
    3.干扰 以下几种情况对检测值无显著影响（＜10%）
    胆红素 ≤684μmol/L
    血红蛋白≤5g/L
    甘油三酯≤33.9mmol/L
    【参考范围】
    男：17~106μg/L。
    女：14~66μg/L。
    检测系统2：Siemens Dimension
    【方法与原理】
    1.方法 非均相免疫法。
    2.原理
   
    反应中CPR在577nm处吸光度变化速率与样本中肌红蛋白浓度成正比。
    【仪器】
    Siemens Dimension系列自动生化分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Siemens。
    2.试剂船1孔（液体）：0.09mmol/ml（反应体系浓度，下同）的结合物（β-吡喃半乳糖苷）；3孔（片剂）：1.8mg/ml CrO2-Ab；4、5、6孔（液体）：10.3mmol/L氯酚红-β-d-吡喃半乳糖苷（CPRG）；7孔（液体）：42mg/ml底物稀释缓冲液。
    3.未开封试剂盒2~8℃保存可稳定至效期；在仪器中，未打孔或未水化试剂稳定30天；4、5、6孔打孔后稳定5天，1、3、7孔打孔后稳定10天。
    4.质控品 Bio-Rad公司Cardiac Markers Plus Control，181、182及183三个水平。
    5.校准品 Siemens MYO校准品（Cat.No RC422），靶值参见不同批号说明书。
    【参数设置】
    1.Sample vol：20μl
    2.Reagent 1 vol：30μl
    3.Reagent 2 vol：50μl
    4.Wavelength Pri：577nm Sec：700nm
    5.Method： rate
    6.Dynamic range：0~1000
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后需校准；同一批号试剂使用3个月后需校准。
    2.维护保养如更换光源、清洗比色杯、清洁光路、更换管路等之后需校准。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意需重新校准。
    【性能参数】
    1.精密度

    浓度（μg/L）
批内
总
SD（μg/L）
CV%
SD（μg/L）
CV%
水平1
40
1.5
3.7
2.3
5.8
水平2
177
3.9
2.2
5.9
3.3
水平3
431
7.7
1.8
14
3.3

    2.检测范围0~1000μg/L。若样品中肌红蛋白含量大于1000μg/L，需用生理盐水稀释2~20倍后检测，结果乘以稀释倍数。
    3.干扰 以下几种情况对检测值无显著影响（＜10%）
    胆红素    ≤1026μmol/L
    血红蛋白 ≤10g/L
    甘油三酯 ≤16.93mmol/L（高脂样本超过反应允许吸光度，仪器报警“abnor-
    mal reaction”，这时应15 000转高速离心15分钟后，取下层清
    亮液体测定。）
    【参考范围】
    男性：16~96μg/L。
    女性：9~82μg/L。
    【临床意义】
    NT-proBNP升高：
    1.血浆NT-proBNP浓度升高与心功能不全严重程度密切相关，且在无症状心力衰竭时NT-proBNP也已有升高。此外，NT-proBNP水平对判断呼吸困难是由肺部疾病引起抑或由心力衰竭引起具有重要意义。在原发性肺疾患心功能正常者，其血浆NT-proBNP水平不升高，而心力衰竭所致呼吸困难者，血浆NT-proBNP显著升高。
    2.原发性高血压，原发性高血压伴左室肥厚，急性心肌梗死，心绞痛发作，脑梗死及肾功能不全。
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清或肝素锂抗凝血浆）。
    2.血清/血浆标本室温下可稳定3天，2~8℃稳定3天，-20℃稳定12个月。
    【方法与原理】
    1.方法 非均相免疫法。
    2.原理
   
    上述反应的有色产物在510nm处的吸光度变化与NT-proBNP浓度成正比。
    【仪器】
    Siemens Dimension系列自动生化分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Siemens。
    2.试剂船1~4、6孔为片剂，7~8孔为液体。1、2孔为0.056mg/mlFADP、68.8mg/ml D-脯氨酸；3、4孔为0.23 mg/ml Apo-D-氨基酸氧化酶、0.19mg/ml辣根过氧化物酶、3.9mg/ml辣根DCHBS、0.94mg/ml 4-AAP；6孔为1.3mg/ml抗体-CrO2、7孔为缓冲液和稳定剂；8孔为抗体-碱性磷酸酶。
    3.未开封试剂盒2~8℃保存可稳定至效期；在仪器中，未打孔或未水化试剂稳定30天，打孔后1~4孔稳定2.5天，6~8孔稳定5天。
    4.质控品 Bio-Rad公司Cardiac Markers Plus Control，181、182及183三个水平。
    5.校准品 Siemens Dimension PBNP校准品（Cat.No.RC43），靶值参见不同批号说明书。
    【参数设置】.
    1.Sample Volume：50μl
    2.Antibody-CrO2：25μl
    3.Antibody-ALP：40μl
    4.Wavelength Pri：510nm Sec：700nm
    5.Method： rate
    6.Dynamic range：10~30000
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后需校准；同一批号试剂使用30天后需校准。
    2.维护保养如更换光源、清洗比色杯、清洁光路、更换管路等之后需校准。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意需重新校准。
    【性能参数】
    1.精密度

    浓度（pg/ml）
批内
总
SD（pg/ml）
CV%
SD（pg/ml）
CV%
水平l
175.5
2.0
1.1
6.8
3.8
水平2
3733.8
71.8
1.9
115.9
3.1

    2.检测范围 10~30 000pg/ml。若样品中NT-proBNP含量大于30 000pg/ml，需用生理盐水稀释2~20倍后检测，结果乘以稀释倍数。
    3.干扰 结合胆红素≤1026μmol/L，TG≤33.9mmol/L，Hb≤10g/L对NT-proBNP在125 pg/ml水平时检测值无显著影响（＜10%）。
    【参考范围】
    本实验室：0~125 pg/ml（＜75岁）。
    0~450 pg/ml（≥75岁）。
    【临床意义】
    糖化白蛋白能反映过去2周~1个月的血糖平均水平，可用于糖尿病用药治疗开始期、妊娠、外伤、急性并发症等情况时血糖水平的监测。
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清或肝素锂抗凝血浆）。
    2.血清或血浆标本2~8℃稳定7天，-20℃可长期保存。
    【方法与原理】
    1.糖化白蛋白的测定 酶法、终点法。
    注：KAOD：酮胺氧化酶；POD：过氧化物酶；TOBD：N，N-双（4-磺丁基）-3-甲基苯胺
    2.白蛋白测定 溴甲酚紫法、终点法。
    溴甲酚紫（BPC）与白蛋白反应生成蓝色复合物，测定此蓝色复合物的吸光度而定量白蛋白浓度。
    3.糖化白蛋白值（%）计算
    （1）得出的糖化白蛋白浓度除以白蛋白浓度，算出待测样品中的糖化白蛋白值（%）。
    （2）应使本法测出的值与既有的Lucica GA法或专用液体色谱的值一致，需要用单位转换计算。
    （3）单位转换：专用液相色谱的值一（本法糖化白蛋白比值/1.14×100）+2.9。
    【仪器】
    Beckman Coulter AU系列全自动生化分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 日本旭化成制药株式会社。
    2.糖化白蛋白试剂 1 KAOD：30U/ml；TODB：2.0mmol/L。
    3.糖化白蛋白试剂2 蛋白酶：40kU/ml；4-氨基安替比林：5.0mmol/L。
    4.白蛋白试剂1 前处理液。
    5.白蛋白试剂2 BCP：0.13g/L。
    6.试剂稳定性 未开盖试剂2~10℃保存至试剂盒标示效期，开盖后2~10℃可稳定30天。
    7.质控品 试剂盒配套质控品。
    8.校准品 试剂盒配套校准品。
    【参数设置】
    糖化白蛋白
    1.Sample vol：3.5μl   Dil vol：0μl   Pre-Dilution Rate：1
    2.Reagent 1 vol：150μl Dil vol：0μl
    3.Reagent 2 vol：37μl Dil vol：0μl
    4.Wavelength Pri：540nm Sec：700nm
    5.Point Fst：0 Lst：27
    6.Point Fst：0 Lst：10
    7.Method：end Reaction：（+）
    8.Reagent OD Limit：First L-2.0 First H 2.5 Last L-2.0 Last H 2.5
    9.Dynamic range：5.1~40.9
    10.Cal type：AB
    11.Correlation factor：See updated information on parameters
    白蛋白
    1.Sample voi：2μl  Dil vol：0μl Pre-Dilution Rate：1
    2.Reagent 1 vol：150μl   Dil vol：0μl
    3.Reagent 2 vol：75μl Dil vol：0μl
    4.Wavelength Pri：600nm Sec：660nm
    5.Point Fst：0 Lst：27
    6.Point   Fst：0   Lst：10
    7.Method：end Reaction：（+）
    8.Reagent OD Limit：First L-2.0  First H 2.5 Last L-2.0 Last H 2.5
    9.Dynamic range：8.2~80
    10.Cal type：AB
    11.Correlation factor：See updated information on parameters
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后，应校准。
    2.维护保养后如更换光源、清洗比色杯、清洁光路及仪器后光电校正、更换管路等应校准。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    【性能参数】
    1.精密度批内CV＜3.0%。
    2.检测范围 3.2%~68.1%。
    3.干扰 以下几种情况对检测值无显著影响
    游离胆红素 ≤250μmol/L
    合胆红素    ≤260μmol/L
    血红蛋白    ≤2.0g/L
    乳糜度      ≤1930度
    葡萄糖      ≤55.5mmol/L
    抗坏血酸   ≤100mg/dl
    【参考范围】
    本实验室：11%~16%。   
    【临床意义】
    1.升高
    （1） ACE主要用于结节病的诊断和疗效监测，其活性反映结节病活动性和严重程度。Ⅰ期患者阳性率为68%，Ⅱ期为86%，Ⅲ期为91%。经强的松治疗后活性可明显下降。
    （2）肺结核、淋巴瘤、戈谢病、麻风病、未经治疗的甲亢、银屑病、新生儿呼吸窘迫综合征、淀粉样变性病、组织浆细胞病（一种真菌引起的呼吸道疾病）、糖尿病等可见ACE水平升高。
    2.降低经激素治疗或者对结节病进行治疗后可见ACE水平降低，其他ACE下降的情况有：慢性阻塞性肺病、囊性纤维化、肺气肿、肺癌等。
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清）。EDTA可抑制ACE活性。
    2.采血后3小时内离心，血清标本2~8℃稳定30天，-20℃稳定6个月。超过5天后测定建议-20℃保存。
    3.避免溶血。
    【方法与原理】
    1.方法 酶法、速率法。
    2.原理 ACE催化血管紧张素I转化为血管紧张素Ⅱ，同时调节合成底物（FAPGG）分解生成一个氨基酸衍生物和一个二肽。这个分解反应可通过波长340nm处吸光度的下降来检测，该波长处吸光度下降速率与样本中ACE的活性成正比。
    【仪器】
    Beckman Coulter AU系列全自动生化分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 北京九强生物技术有限公司。
    2.试剂 FAPGG、缓冲液。
    3.试剂稳定性未开瓶试剂2~8℃密封避光保存可稳定12个月或至效期；开瓶后在仪器仓中稳定28天。
    4.质控品 配套质控品，GQ-ACE 1和GQ-ACE 2两个水平。
    5.校准品试剂盒配套校准品。
    【参数设置】
    1.Sample vol：15μl Dil vol：0μl Pre-Dilution Rate：1
    2.Reagent 1 vol：150μl Dil vol：0μl
    3.Wavelength Pri：340nm Sec：520nm
    4.Point Fst：17 Lst：27
    5.Method：rate Reaction：（-）
    6.Linearity：25%
    7.Lag Time：no
    8.Min OD：-2.0    Max OD：2.5
    9.Reagent OD Limit：First L-2.0 First H 2.5 Last L-2.0 Last H 2.5
    10.Dynamic range：12~150
    11.Cal type：AB
    12.Correlation factor：See updated information on parameters
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后，应校准。
    2.维护保养后如更换光源、清洗比色杯、清洁光路、光电校正、更换管路等应校准。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    4.特殊情况校准要求参见仪器操作维护手册。
    【性能参数】 
    1.精密度 批内CV＜2.7%，批间CV＜8.1%。
    2.检测范围 血清样本为12~150U/L，当样本浓度超过检测范围上限时，可用生理盐水稀释2倍后重新测定，结果乘以稀释倍数。
    3.干扰 黄疸或溶血的血清不能用来检测ACE的活性；脂血样本超过反应允许吸光度时，结果将标记@，这时应15 000转高速离心15分钟后，取下层清亮液体测定。
    【参考范围】
    本实验室：10~68U/L。
    【临床意义】
    1.血清镁达2.5mmol/L时可出现临床症状，达5.0mmol/L呼吸麻痹。高镁血症可见于：
    （1）肾脏疾病：慢性肾炎少尿期、尿毒症、急慢性肾衰竭。
    （2）内分泌疾病：甲状腺功能减退、甲状旁腺功能减退、艾迪生病，未治疗的糖尿病昏迷（可达2.5~4.5mmol/L）。
    （3）镁剂治疗不当：如用硫酸镁治疗先兆子痫过量，含镁灌肠液灌肠被吸收等。
    （4）多发性骨髓瘤、严重脱水症等。
    2.血清镁低于0.5mmol/L可出现临床症状。引起低镁血症原因有：
    （1）经肾丢失：使用肾毒性药物、利尿剂，遗传性肾小管生吸收障碍。
    （2）营养性摄人减少，有胃肠道丢失。
    （3）内分泌疾病：高醛固酮血症、甲状腺功能亢进、甲状旁腺功能亢进、糖尿病酮症酸中毒。
    （4）原发性低镁血症。
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清或肝素锂抗凝血浆，EDTA、枸橼酸盐、草酸盐不能作为抗凝剂，应避免溶血）。
    2.血浆/血清常温稳定7天。
    【方法与原理】
    1.方法 二甲苯胺蓝比色法、终点法。
    2.原理
   
    上述反应中520nm处吸光度的增加与样品中镁的含量成正比。
    【仪器】
    Beckman Coulter AU系列自动生化分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 Beckman Coulter。
    2.试剂 0.18mmol/L二甲苯胺蓝，lOOmmol/L Tris缓冲液，450mmol/L碳酸铵，100mmol/L乙二醇双（α-氨基乙基醚）四乙酸（EGTA）。
    3.试剂稳定性 未开瓶试剂2~8℃可稳定到效期，开瓶后在仪器上稳定14天。
    4.质控品 Bio-Rad公司Liquichek人血清不定值临床化学控制品，691及692两个水平。
    5.校准品 Beckman Coulter公司多项校准液（66300），靶值参见不同批号说明书。
    【项目校准】
    1.定期校准：每周。
    2.更换试剂批号后需校准。
    3.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意需重新校准。
    4.维护保养如更换光源、清洗比色杯、清洁光路、更换管路等之后需校准。
    5.特殊情况校准要求参见仪器操作维护手册。
    【参数设置】
    1.Sample vol：1.0μl Dil vol：0μl Pre-Dilution Rate：1
    2.Reagent 1 vol：200μl Dil vol：0μl
    3.Reagent 2 vol：0μl Dil vol：0μl
    4.Wavelength Pri：520nm Sec：800nm
    5.Point Fst：0 Lst：10
    6.Method：End Reaction：（+）
    7.No Lag Time
    8.Reagent OD Limit：First L 0.9 First H 1.5 Last L 0.9 Last H 1.5
    9.Dynamic range：0.2~3.3
    10.Cal type：AB
    11.Correlation factor：See updated information on parameters
    【性能参数】
    1.检测范围0.2~3.3mmol/L。若浓度高于3.3mmol/L，需用双蒸水稀释3~5倍后检测，结果乘以稀释倍数。
    2.干扰 肉眼溶血对结果有明显影响，溶血标本不再检测。总胆红素≤479μmol/L、甘油三酯≤11.3mmol/L、钙≤7.5mmol/L、血红蛋白≤7.5g/L时，其干扰可被临床接受。
    【参考值】
    本实验室：0.7~1.1mmol/L。
    【临床意义】
    同型半胱氨酸是多种疾病的危险因素，特别是与心血管疾病密切相关，是心血管疾病发病的一个重要危险因子。同型半胱氨酸升高将刺激血管壁引起动脉血管损伤，导致炎症和血管壁的斑块形成。同型半胱氨酸升高还可以引起神经管畸形及先天性畸形等出生缺陷类疾病。
    血中同型半胱氨酸升高所致疾病如下：冠状动脉粥样硬化，卒中，老年性痴呆，静脉栓塞，新生儿缺陷，习惯性流产。
    【标本要求】
    1.空腹采静脉血3.0ml（血清）。
    2.采血后应在30分钟内离心，血清标本2~8℃稳定7天，-20℃稳定3个月。
    【方法与原理】
    1.方法 酶法。
    2.原理 氧化型同型半胱氨酸经三乙羧乙基膦（TCEP）还原成游离型同型半胱氨酸，游离型同型半胱氨酸与共价底物S-腺苷甲硫氨酸（SAM）在同型半胱氨酸甲基转移酶（HMTase）催化下反应形成蛋氨酸（Met）和S-腺苷同型半胱氨酸（SAH），SAH被SAH水解酶（SAHas）水解成腺苷和同型半胱氨酸，形成的同型半胱氨酸可以循环加入反应，循环放大检测信号。腺苷（Ado）水解为次黄嘌呤（Ino-sme）和氨（NH3），氨在谷氨酸脱氢酶（GLD）的作用下，使NADH转化为NAD+，样本中的同型半胱氨酸的浓度与NADH的变化成正比。原理示意图：
   
    【仪器】
    Beckman Coulter AU系列全自动生化分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 利德曼生化股份有限公司。
    2.试齐0 1腺苷甲硫氨酸（SAM）0.1mmol/L，NADH 0.2mmol/L，三乙羧乙基膦（TCEP）0.5mmol/L。
    3.试剂2 α-酮戊二酸5.0mmol/L，谷氨酸脱氢酶（GLDH）10KU/L，S-腺苷同型半胱氨酸水解酶（SAHase）3.OKU/L，同型半胱氨酸甲基转移酶（HMTase）5.0KU/L，腺苷脱氨酶5.0KU/L。
    4.试剂稳定性 试剂应避光储存。未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期。上机稳定性：放置于仪器中应在2周内用完。
    5.质控品 利德曼配套质控，2水平。
    6.校准品 利德曼配套校准品，靶值参见不同批号说明书。
    【项目校准】
    1.定期校准：厂商无推荐，最长校准周期应小于半年。
    2.更换试剂批号后，应校准。
    3.维护保养后如更换光源、清洗比色杯、清洁光路及仪器后光电校正、更换管路等应校准。
    4.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    5.特殊情况校准要求参见仪器操作维护手册。
    【参数设置】
    1.Sample vol：13.0μl Dil vol：0μl Pre-Dilution Rate：1
    2.Reagent 1 vol：240μl Dil vol：0μl
    3.Reagent 2 vol：65μl Dil vol：0μl
    4.Wavelength Pri：340nm Sec：700nm
    5.Point Fst：24 Lst：27
    6.Method：End Reaction：（-）
    7.No Lag Time
    8.Reagent OD Limit：First L-2.0 First H 2.0   Last L-2.0 Last H 2.0
    9.Dynamic range：2.5~50
    10.Cal type：AB
    11.Correlation factor：See updated information on parameters
    【性能参数】
    1.精密度 批内＜8%，批间差＜15%。
    2.检测范围 2.5~50μmol/L，结果如超过线性范围，可用无菌水或生理盐水稀释两倍，测定结果乘以2。
    3.干扰 以下几种情况对检测值无显著影响（＜10%）
    胆红素    ≤500μmol/L
    血红蛋白 ≤5g/L
    维生素C ≤50mg/dl
    甘油三酯 ≤11.3mmol/L（遇脂血标本，应15 000转高速离心15分钟后，
    取下层清亮液体测定。）
    【参考范围】
    本实验室：5~15μmol/L。
    【临床意义】

项目
临床意义
酸碱度（pH）
＜7.35酸中毒，＞7.45碱中毒，在7.35~7.45之间可能是正常、代偿型酸 碱中毒或混合型酸碱平衡紊乱
二氧化碳分压（PCO2）
反映肺泡PCO2值，PCO2升高示肺通气不足（原发或继发），CO2潴留，PCO2降低示肺通气过度（原发或继发），CO2排出过多
氧分（PO2）
判断缺氧程度及呼吸功能，动脉血气PO2＜55mmHg示呼吸功能衰竭
血红蛋白    （THb）
与氧含量、氧容量有密切关系的一项参数，Hb降低，携O2减少，缓冲酸碱能力降低，氧含量也降低，参与BE、SB及SO2c的运算

    续表

项目
临床意义
标准碳酸氢盐    （SB）
表示血液的储备量，SB升高示代谢性碱中毒，SB降低示代谢性酸中毒
实际碳酸氢盐    （AB）
血液中实测量，AB＞ SB为呼吸性酸中毒，AB＜SB为呼吸性碱中毒，AB和SB升高为代谢性碱中毒，AB和SB降低为代谢性酸中毒
碱剩余（BE）
BE正值增大为代谢性碱中毒，BE负值增大为代谢性酸中毒
总CO（TCO2）
与代谢因素和呼吸因素有关，主要说明代谢因素影响酸碱平衡，因TCO395%的为量
氧饱和度（SO2c）
判断Hb与氧亲和力的指标，H+、2，3-DPG、PO2和PCO2均影响SO2c值
钙（Ca2+）
见钙（Ca）测定
钾（K+）
见钾（K）测定
钠（Na+）
见钠（Na）测定
葡萄糖（Glu）
见葡萄糖（Glu）测定
乳酸（Lac）
见乳酸（LA）测定

    【标本要求】
    1.根据不同规格的血气注射器抽入该注射器规定量的动脉血1~2ml（肝素锂或肝素钠抗凝动脉血）。
    2.密封送检。
    【方法与原理】
    1.pH——电位法血样中的H+与玻璃电极膜中的金属离子进行离子交换产生电位变化，此电位与H+浓度成正比，再与不受待测溶液H+浓度影响的参比电极进行比较测量，得出溶液的pH值。
    2.PCO2——电位法原理与pH电极基本相同，不同的是pH电极外面另有一层聚四氟乙烯或硅橡胶膜，CO2可自由透过，其他离子不能透过，此膜与pH电极间含有电解液，PCO2的改变可影响电解液的pH值，PCO2的对数与pH值呈直线关系。
    3.PO2——电流法标本中的O2经过聚丙烯膜到达铂阴极表面时，O2不断地被还原，阳极又不断地产生Ag+并与Cl-结合成AgCl沉积在电极上，氧化还原反应在阴阳极之间产生电流，其强度与PCO2成正比。
    4.HCT——阻抗法。
    5.K+、Na+、Ca2+——电位法。
    6.Glu——酶法。
    7.Lac——电流法。
   【仪器】
    美国IL公司GEM Premier 3000血气分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商 美国IL公司。
    2.试剂 仪器配套一次性试剂包，试剂包一体化设计，包含分析所需的感应器，校准液，校准气以及废物池，电极室的温度控制在37℃。可按照需要选择不同规格的标本份数及检测项目的试剂包。
    3.试剂稳定性试剂包在15~25℃条件下保存，试剂包安装上机后有效期为21天。
    4.质控品 GEM Premier 3000血气分析仪配套质控922L/N/H，三个水平。
    5.校准品 GEM Premier 3000血气分析仪配套校准液（0024001587）。
    【操作步骤】
    1.标本接收 对采集来的动脉血，首先检查标本是否合格，包括标本量（测定一次需要150μl血标本），标本是否有凝块及标本运送过程中是否盖好密封塞子与外界空气隔绝。
    2.实验室收到合格血标本后应立即测定，轻轻颠倒混匀及双手搓动该标本各不少于5次，至少30秒钟，待标本充分混匀后，仪器为Ready状态时，按Pan-els键选择测定项目组合后，在主菜单上选择血液标本类型：Arterial、Venous、Capillary或Other。常规情况下选择Arterial。
    3.屏幕显示Preparing for Sample，Please Wait时，仪器吸样针自动从仪器下端推出，准备检测标本。小心地将血气注射器密封塞子取下，将注射器口处的血液推排少量到吸水纸或医用纱布上，弃去。
    4.迅速将注射器口插入仪器的吸样针内，选择OK键仪器开始吸样，当听到嘀嘀响声后出现Remove the Sample时，迅速移开标本，以免折弯吸样针，此时仪器吸样针自动收回。取出注射器后应用注射器针头或密封塞子重新封好该注射器口，将标本弃至相应容器中。仪器此时出现输入患者及操作者信息的界面，按OK键确认。
    5.Waiting for Results为等候分析结果时间，测定完成后仪器自动显示和打印结果，并将数据自动传人LIS系统。
    6.注意事项 由于血气分析的特殊性，送检的标本一定要在15分钟内进行测定，测定前一定要充分混匀。如遇更换试剂包或仪器自动校正需等待一段时间时，务必将标本放在2~8℃冰箱或冰水内保存，最多可以保存30分钟。如果患者在自然呼吸状态下，P02+PC02值大于150mmHg时，应重复测定，如果仍然大于150mmHg，考虑标本可能由于没有及时隔绝空气而被污染。
    7.更换试剂包
    （1）试剂包内试剂用完或试剂包有效期结束（包内仍有未用试剂）时，仪器自动显示需更换试剂包，此时不论试剂包内试剂是否用完都应更换新试剂包。
    （2）将仪器左侧的试剂箱门锁打开，取出废弃的试剂包，检查新的试剂包外包装，确定其在有效期内，拆去试剂盒外包装，用力将试剂包侧面的保护盖取下，确认试剂包是干燥的（如有漏液不要使用），将其匀速平稳的插入仪器的试剂箱内，仪器会自动扫描条码读取新的试剂包信息，并提示锁上门锁，等待仪器自检，约30分钟后仪器恢复READY状态即可使用，此时在屏幕左下角处会显示新试剂包的可检测的标本份数及有效期。
    【项目校准】
    根据仪器内设定的时间，自动进行一点及两点校准。在READY界面时，如果左侧项目一栏内有红色显示时，仪器会进行自动校准。如自动校准不通过，需按DIAGNOSTICS菜单下的2PT-CALIBRATION，命令仪器进行两点校准，如果两点校准仍然不通过，请通知工程师协助查找原因，仪器停止使用，考虑更换试剂包。
    【性能参数】
    线性范围

项目
仪器可测定的线性范围
pH
PCO2
PO2
Na+
K+
6.80~7.80
5~115mmHg
0~760mmHg
100~200mmol/L
1.0~20.0mmol/L

    续表

项目
仪器可测定的线性范围
Ca2+
Glu
Lac
HCT
0.10~5.00mmol/L
1.1~27.8mmol/L
0.3~15mmol/L
15%~65%

    【参考范围】

项目
单位
动脉血气参考范围
pH
7.35~7.45
PCO2
mmHg
35~48
pO2
mmHg
83~108
Na+
mmol/L
136~145
K+
mmol/L
3.4~4.5
Ca2+
mmol/L
1.15~1.35
Glu
mmol/L
3.6~6.0
Lac
mmol/L
0.5~2.2
HCT
%
35~51
mmol/L
18.0~23.0
TCO2
mmol/L
22.0~32.0
BE
mmol/L
-3.0~+3.0
SO2c
%
95~98
THb
g/L
117~174

    【临床意义】
    苯巴比妥是一种抗癫痫药物，能够抑制中枢神经系统，随着剂量由小到大，中枢抑制的作用由浅入深，相继出现镇静、催眠直至麻醉的作用，过量时可因呼吸中枢麻痹而致死。药物浓度低于15μg/ml疗效不佳；高于40μg/ml出现中枢神经系统毒性反应，主要表现为眼球震颤、眩晕、共济失调。一些长期服药的患者会发展为巨红细胞贫血、巨幼细胞贫血和骨软化症等。
    【标本要求】
    1.空腹服药前（谷浓度）或服药后1~3小时（峰浓度）取静脉血3ml（血清或肝素、枸橼酸钠、草酸盐/氟化钠、EDTA抗凝血浆）。
    2.血清/血浆分离后2~8℃可稳定24小时。
    【方法与原理】
    1.方法 竞争结合法、荧光偏振免疫分析（FPIA）。
    2.原理 样本中的苯巴比妥（被分析物）、荧光标记的苯巴比妥（标记物）和抗苯巴比妥抗体同时加入反应杯中。样本中的苯巴比妥和试剂中标记的苯巴比妥与苯巴比妥抗体竞争性结合，如果样本中苯巴比妥含量高，则未结合的标记物多，如果样本中苯巴比妥含量低，则未结合的标记物少（图1-1）。
   
    未结合的标记物分子较小，当被偏振光激发时快速转动，不能够发出统一方向的荧光，因此偏振光读数降低（图1-2）。
   
    与抗体结合的标记物分子较大，当被偏振光激发时转动速度很慢，能够发出单一方向的荧光，因此偏振光读数升高（图1-3）。
   
    AxSYM系统通过测定与抗体结合的标记物所发出的偏振荧光的变化量，达到检测标本中苯巴比妥含量的目的。偏振光变化量越大，被测药物的浓度越低。
    【仪器】
    Abbott AxSYM全自动免疫分析仪。
    【试剂】
    1.试剂厂商Abbott。
    2.试剂
    （1）主要套装试剂
    1）苯巴比妥抗体（14.5ml 1瓶）：含25%的羊抗苯巴比妥多克隆抗体，基质为生理盐水，含蛋白稳定剂和叠氮钠。
    2）前处理溶液（8.6ml 1瓶）：含表面活性剂的Tris缓冲液，叠氮钠作防腐剂。
    3）苯巴比妥荧光标记物（15.1ml 1瓶）：含0.01%的苯巴比妥荧光标记物，基质为Tris缓冲液，含表面活性剂和叠氮钠。
    （2）其他辅助试剂
    1）探针清洗液：仪器探针清洗液（220ml两瓶）：含2%的氢氧化四乙胺（TEAH），15~30℃保存。
    2）溶液4稀释液（10L 1瓶）：含0.1mol/L磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗微生物剂。15~30℃保存。
    3.套装试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，不得冻存，开盖后试剂在仪器冷藏位上的稳定期是336小时。
    4.质控品 Bio-Rad公司Liquichek人血清未定值临床化学控制品，691及692两个水平。
    5.校准品 Abbott公司单项校准液（7A70-01），靶值参见不同批号说明书。
    【参数设置】
    1.测定全称：Phenobarbital
    2.测定简称：Pheno
    3.测定编号：634
    4.测定版本：1
    5.校准版本：00
    6.测定文件修正版：400
    7.测定开启：ON
    8.测定方式：FPIA
    9.校准品测定次数：2
    10.Cal A浓度：0.00
    11.Cal B浓度：5.00
    12.Cal C浓度：10.00
    13.Cal D浓度：20.00
    14.Cal E浓度：40.00
    15.Cal F浓度：80.00
    16.默认稀释方式：不稀释
    17.默认校准方法：标准方式
    18.结果浓度单位：μg/ml
    19.结果小数点位置：2
    20.最大背景强度：13 500.0000
    21.最小强度：14 000.0000
    22.治疗浓度下限：15.00
    23.治疗浓度上限：40.00
    24.测定最小值：1.65
    25.测定最大值：800.00
    26.采用不稀释方式的最低浓度：0.00
    27.采用不稀释方式的最高浓度：80.00
    28.采用第一稀释方式的最低浓度：2.40
    29.采用第一稀释方式的最高浓度：160.00
    30.采用第二稀释方式的最低浓度：5.00
    31.采用第二稀释方式的最高浓度：320.00
    【项目校准】
    1.更换试剂批号后，应校准。
    2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
    3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
    【性能参数】
    1.精密度 批内变异2.2%~3.7%.总变异2.9%~4.4%。
    2.准确度 回收率平均为99.2%±2.6%。
    3.灵敏度 最低检测限1.10μg/ml。
    4.特异性 苯巴比妥的主要代谢产物p_羟基苯巴比妥浓度为22pg/ml，苯巴比妥浓度分别为15μg/ml和40μg/ml时，苯巴比妥浓度测定值分别变化20%（3.0yμg/mD和12%（4.8μg/ml）；高浓度的异戊巴比妥、仲丁比妥、戊巴比妥、司可巴比妥的苯巴比妥测定值低于检测限，说明这些苯巴比妥类似物对苯巴比妥测定的干扰可以忽略。
    5.干扰物质 血液中胆红素含量15mg/dl，血红蛋白含量1000mg/dl，甘油三酯含量2500mg/dl，总蛋白含量3.0~10.0g/dl，对苯巴比妥测定的干扰率小于10%。
    6.相关性 与雅培TDx/TDxFLx Phenobarbital相关系数为0.995。
    【有效治疗浓度】
    15~40μg/ml。


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