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【医技】检验科医疗诊疗规范——第二篇 临床基础检验01-10
作者:王泓 日期:2014-06-19
【临床意义】
1.PT延长见于先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症和低（无）纤维蛋白原血症。获得性PT延长见于肝脏疾病、弥散性血管内凝血（DIC）、原发性纤溶症、维生素K缺乏症、血循环中存在抗凝物质（如狼疮抗凝物）等。
2.PT缩短见于先天性因子V增多症、长期口服避孕药、血栓前状态和血栓性疾病等。
【标本要求】
1.空腹取静脉血2.7ml，0.109mol/L枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与全血比例1：9。
2.血浆标本4℃冰箱可保存不超过4小时。避免标本在采集和处理过程中发生溶血。
3.血细胞比容（HCT）＞55%时，抗凝剂与血液的比例须按公式：抗凝剂（ml）＝（100%-HCT）×血液（ml）×0.00185调整。
【方法与原理】
1.方法 凝固法（散射比浊法）。
2.原理 标本中加入试剂后，起始的散射光强度定为0，凝血过程完成时的散射光强度定为100%，凝血时间定义为：在凝血过程实时曲线（凝血时间一散射光强度）上，50%的散射光强度所对应的时间。血浆中的凝血因子激活顺序如图2-1所示：
【仪器】
日本Sysmex公司CA7000或CA15 00全自动凝血分析仪。
【试剂】
1.试剂 人胎盘凝血活酶、氯化钙（CaCl2）、稳定剂和防腐剂。在说明书提供的配制后稳定时间内使用。
2.标准 物德图Siemens公司人标准血浆。
3.质控品 美国Bio-Rad公司Lyphochek Coagulation Control 1、Lyphochek Coagulation Control 2和Lyphochek Coagulation Control 3冻干定值质控血浆。
【参数设置】
1.标本体积：50μl。
2.试剂体积：100μl。
3.标本预温时间：180秒。
4.波长：660nm。
5.反应类型：凝固法。
6.检测器灵敏度：低灵敏度。
【操作步骤】
1.检查所取标本是否合格，是否出现凝血、血少（血量少于应抽血量的90%）的情况，不合格的需要重抽。
2.打开仪器电源，预热，当仪器右上角的“Start”键由灰色变为黑色时，仪器准备完毕。同时开启终端电脑、进入“检验科信息管理系统”，并适时完成患者信息录入。检查数据传输是否在线。
3.检查蒸馏水和废液桶。
4.在比色杯池中倒入新比色杯，不要超过池子边缘的红线。
5.清空垃圾盒中的废弃比色杯。
6.按左下角的“Set Reagents”键，在仪器设定的位置放入相应的试剂和清洗液，并按位置键输入试剂的量，该位置键由红变绿。
7.标本3000转/分钟离心10分钟，观察标本是否有溶血、严重脂血和血细胞比容异常的标本。溶血标本应重抽；严重脂血标本应在10 000转/分钟离心15分钟后，取试管下层清亮血浆测定；血细胞比容大于55%时，应重新计算标本量或抗凝剂量，重新抽血。按顺序将标本插入标本架中，标本架置于标本入口处。
8.按“Worklist”键，再按“ID Number”键输入标本号，按测定项目键（PT），再按“Enter”键确定。如需连续测校准本，可用上下箭头键将光标移至第一个标本，再按“Repeat”键，然后输入需要重复的标本个数，按“Enter”键确认。
9.将仪器盖盖好，按屏幕右上角“Start”键，开始实验。
10.实验完成后，按“Probe rinse”键冲洗两次，将试剂取出后即可关机。
11.签发报告 在信息管理系统相应界面，核对结果及患者信息，对于与临床诊断不符合的应重复测定（必要时还应与既往结果对照，并结合病情判断结果是否合理）。
【项目校准】
1.按“Standard Curve”键，选择项目“PT”，再按“Analysis Setting”键，输入校准血浆名称、百分活动度、倍比稀释倍数和每一个点的测定次数，按“Return”键退出，再按“Set”键存储。
2.按“Worklist”键，再按“Standard Curve”键，在输入标本架的第一个位置出现校准血浆名称。
3.在标本架的第一个位置放上制备好的校准血浆，按“Start”键开始校准。
4.校准完成后，按“Standard Curve”键，再按“PT”选择项目，检查标准曲线是否良好，如果合格，按两次“Update”键存储；如果曲线不好，按“Update”键后，再按“No update”键清除。
5.按“Standard Curve”键，选择项目“PT”，再按“Manual Entry”键，用上下箭头移动光标至“Normal”位置，输入正常参考范围，然后光标移至“ISI”位置，输入厂家试剂说明书上标注的ISI值或用INR校准品确定的本机ISI值（Local ISD。
【危急值报告】
凝血酶原时间测定值≤9秒或≥40秒应及时报告临床医生。
【参考范围】
本实验室：PT10.9~12.6秒，活动度74.0%~96.0%，国际标准化比率（INR）O.88~1.12。治疗深静脉血栓、肺栓塞、动脉血管疾病、心肌梗死，INR值控制在2.0~3.0；口服抗凝剂预防血栓形成，INR值控制在1.5~2.5。
【性能参数】
1.精密度 批内变异CA7000为0.49%~0.79%，CA1500为0.54%~0.55%；批间变异CA7000为1.1%~1.9%。
2.干扰实验
（1）脂血对实验结果的影响：当实验标本血浆的浊度为0~2780个Fo rmazine浊度单位时，脂血对实验结果没有影响。
（2）溶血对实验结果的影响：当实验标本血浆内的血红蛋白≤4.8g/L时，溶血对实验结果没有影响。
（3）黄疸标本对实验结果的影响：当实验标本血浆直接胆红素≤348.8μmol/L，间接胆红素≤319.8μmol/L时，黄疸标本对实验结果没有影响。
【临床意义】
1.延长见于因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ血浆水平降低，如血友病A、血友病B和第Ⅺ因子缺乏症；严重的凝血酶原（因子Ⅱ、因子V、因子x）和纤维蛋白原缺乏症，如肝脏疾病、阻塞性黄疸、新生儿出血症、肠道灭菌综合征、口服抗凝剂、应用肝素、低（无）纤维蛋白原血症和吸收不良综合征等；纤维蛋白溶解活性亢进，如DIC、原发性纤溶症及存在大量纤维蛋白原降解产物（FDP）；血循环中有抗凝物质，如狼疮抗凝物（LA）。
2.缩短见于高凝状态，如DIC的高凝血期；血栓栓塞性疾病，如心肌梗死、不稳定型心绞痛、脑血管病变、肺梗死、静脉血栓形成等。
【标本要求】
1.空腹取静脉血2.7ml，0.109mol/L枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与全血的比例1：9。
2.血浆标本4℃冰箱可保存不超过4小时。避免标本在采集和处理过程中发生溶血。
3.血细胞比容（HCT）＞55%时，抗凝剂与血液的比例须按公式：抗凝剂（ml）＝（100%-HCT）×血液（ml）×0.001 85调整。
【方法与原理】
1.方法 凝固法（散射比浊法）。
2.原理 标本中加入试剂后，起始的散射光强度定为0，凝血过程完成时的散射光强度定为100%，凝血时间定义为：在凝血过程实时曲线（凝血时间一散射光强度）上，50%的散射光强度所对应的时间（图2-2）。
【仪器】
日本Sysmex公司CA7000或CA1500全自动凝血仪。
【试剂】
1.试剂1 脑磷脂（提取自兔脑粉）、1.0×10-4 mol/L鞣花酸、缓冲液、稳定剂、防腐剂。
2.试剂2 0.025mol/L氯化钙溶液。
3.质控品 美国Bio-Rad公司Lyphochek Coagulation Control 1、LyphochekCoagulation Control 2和Lyphochek Coagulation Control 3冻干定值质控血浆。
【参数设置】
1.标本体积：50μl。
2.试剂1：50μl。
3.试剂2：50μl。
4.标本温育时间：60秒。
5.加入试剂1后孵育时间：180秒。
6.波长：660nm。
7.反应类型：凝固法。
8.检测器灵敏度：低灵敏度。
【操作步骤】
详细见PT检测。不同的是步骤（8），即按“Worklist”键，再按“ID Number”键输入标本号，按测定项目键（APTT），再按“Enter”键确定。
【危急值报告】
APTT测定值≤15秒或≥70秒应及时报告临床医生。
【参考范围】
本实验室：22.7~31.6秒。
肝素治疗用于预防血栓形成，维持在正常对照值的1.5倍；用于治疗血栓形成，维持在正常对照值的1.5~2.5倍。
【性能参数】
1.精密度 批内变异CA7000为0.47%~0.73%，CA15 00为0.53%~1.01%；批间变异CA7000为0.7%~1.9%。
2.干扰实验
（1）脂血对实验结果的影响：当实验标本血浆的浊度为0~2780个Formazine浊度单位时，脂血对实验结果没有影响。
（2）溶血对实验结果的影响：当实验标本血浆内的血红蛋白含量≤4.8g/L时，溶血对实验结果没有影响。
（3）黄疸标本对实验结果的影响：当实验标本血浆直接胆红素含量≤348.8μmol/L，间接胆红素含量≤319.8μmol/L时，黄疸标本对实验结果没有影响。
【临床意义】
1.血浆纤维蛋白原增多见于高凝状态，如糖尿病伴血管病变、急性心肌梗死、脑血管病变、口服避孕药、妊娠及妊娠高血压综合征、深静脉血栓形成、动脉粥样硬化、高脂血症等；也见于急性传染病、肾小球疾病活动期、放射治疗后、烧伤、休克、外科大手术后、恶性肿瘤、多发性骨髓瘤等。
2.血浆纤维蛋白原减少见于弥散性血管内凝血（DIC）消耗性低凝血期及纤溶期、原发性纤维蛋白原溶解症、重症肝炎、肝硬化、重度贫血、低（无）纤维蛋白原血症等。
【标本要求】
1.空腹取静脉血2.7ml，0.109mol/L枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与全血比例1：9。
2.血浆标本2~8℃冰箱可保存24小时。避免标本在采集和处理过程中发生溶血。
3.血细胞比容（HCT）＞55%时，抗凝剂与血液的比例须按公式：抗凝剂（ml）＝（100%-HCT）×血液（ml）×0.00185调整。
【方法与原理】
1.方法 凝固法（散射比浊法）、Clauss法。
2.原理
纤维蛋白形成的时间即凝血时间，测定方法同PT、APTT。血浆中纤维蛋白原浓度与凝血时间成反比。样品经1： 10稀释，可排除抑制物干扰。
【仪器】
日本Sysmex公司CA7000或CA1500全自动凝血分析仪。
【试剂】
1.试剂 冻干牛凝血酶（约100NIH U/ml）、稳定剂和缓冲液。按照试剂瓶上标注的体积，用蒸馏水溶解试剂，颠倒混匀，避免剧烈震动，在说明书提供的配制后稳定时间内使用。
2.标准品 德国Siemens公司人标准血浆。
3.质控品 美国Bio-Rad公司Lyphochek Coagulation Control 1、Lyphochek Coagulation Control 2和I。yphochek Coagulation Control 3冻干定值质控血浆。
【参数设置】
1.标本体积：10μl。
2.稀释缓冲液体积：90μl。
3.试剂体积：50μl，取完试剂后用CleanⅡ清洗。
4.标本预温时间：180秒。
5.波长：660nm。
6.反应类型：凝固法。
7.检测器灵敏度：高灵敏度。
【操作步骤】
详细见PT检测。不同的是测定项目为“Fbg”。
【项目校准】
1.按“Standard Curve”键，选择项目“Fbg”，再按“Analysis Setting”键，输入校准血浆名称、纤维蛋白原浓度、倍比稀释倍数和每一个点的测定次数，按“Return”键退出，再按“Set”键保存设置。
2.按“Worklist”键，再按“Standard Curve”键，在输入标本架的第一个位置出现校准血浆名称。
3.在标本架的第一个位置放上校准血浆，按“Start”键开始校准。
4.校准完成后，按“Standard Curve”键，再按“Fbg”选择项目，检查标准曲线是否良好，如果合格，按两次“Update”键存储；如果曲线不好，按“Update”键后，再按“No update”键清除。
【危急值报告】
Fbg测定值≤1.0g/L时应及时报告临床医生。
【参考范围】
本实验室：1.80~3.50g/L。
【性能参数】
1.精密度 批内重复性CVl.6%~6.4%，批间重复性CV2.7%~3.5%。
2.检测范围 0.8~5.Og/L，仪器自动稀释后可达0.4~9.9g/L。
3.干扰实验 高血脂、大量肝素和纤维蛋白（原）降解产物将干扰测定，使其测定值降低。
【临床意义】
延长见于纤溶增强和血液中存在肝素或类肝素抗凝物质，用于溶栓治疗的监测和纤维蛋白原缺乏症和异常结构的纤维蛋白原的鉴别诊断。
【标本要求】
1.空腹取静脉血2.7ml，0.109mol/L枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与全血比例1：9。
2.血浆标本2~8℃冰箱可保存24小时。避免标本在采集和处理过程中发生溶血。
3.血细胞比容（HCT）＞55%时，抗凝剂与血液的比例须按公式：抗凝剂（ml）＝（100%-HCT）×血液（ml）×0.00185调整。
【方法与原理】
1.方法 凝固法（散射比浊法）。
2.原理
纤维蛋白形成的时间即凝血时间，测定方法同PT、APTT。
【仪器】
日本Sysmex公司CA7000或CA15 00全自动凝血分析仪。
【试剂】
1.试剂 凝血酶试剂冻干粉，含标准量的牛凝血酶和牛白蛋白，用5ml缓冲液溶解后含凝血酶1.5IU/ml。测定前将该试剂预温至37℃。在说明书提供的配制后稳定时间内使用。缓冲液用于溶解凝血酶，含HEPES 25mmol/L，pH7.4、防腐剂5-氯-2-甲基-4-异噻唑-3-酮6mg/L、2-甲基-4-异噻唑-3-酮2mg/L。该缓冲液开盖后在2~25℃可稳定12周。
2.质控品 美国Bio-Rad公司Lyphochek （_oagulation Control 1、LyphochekCoagulation Control 2和Lyphochek Coagulation Control 3冻干定值质控血浆。
【参数设置】
1.标本体积：50μl。
2.试剂体积：100μl，取完试剂后用CleanⅡ清洗。
3.标本孵育时间：60秒。
4.波长：660nm。
5.反应类型：凝固法。
6.检测器灵敏度：低灵敏度。
【操作步骤】
详细见PT检测。不同的是测定项目为“TT”。
【危急值报告】
TT测定值≥150秒应及时报告临床医生。
【参考范围】
本实验室：14~21秒。
【性能参数】
1.精密度 正常人血浆批内变异为1.9%（n= 20），批间变异为2.5%（n=10）。
2.准确度 用凝血酶含量分别为3kμL和1.5kU/L的凝血酶试剂与另一个凝血酶商品试剂进行比较实验，标本取自正常人和含有肝素的血浆，其相关系数分别为0.816和0.803。
3.干扰
（1）脂血对实验结果的影响：当实验样本血浆的浊度为0~2780个Formazine浊度单位时，脂血对实验结果没有影响。
（2）溶血对实验结果的影响：溶血导致红细胞中ADP的释放，激活血小板，且破碎的红细胞本身就具有血小板的活性，容易引起凝血。
（3）黄疸样本对实验结果的影响：当实验样本血浆直接胆红素含量≤348.8μmol/L，间接胆红素含量≤319.8μmol/L时，黄疸样本对实验结果没有影响。
【临床意义】
D-二聚体是纤维蛋白降解产物，血浆中D-二聚体浓度升高表示纤溶增强。当发生血栓时，迅速形成的纤维蛋白激活了纤溶系统，使纤溶酶活性增强，大量纤维蛋白被水解形成纤维蛋白（原）降解产物（FDP），其中的最小片段D-二聚体的浓度急剧升高。因此，D-二聚体可用于弥散性血管内凝血（DIC）的诊断和肺栓塞（PE）、深静脉血栓（DVT）的排除。
【标本要求】
1.空腹取静脉血2.7ml，0.109mol/L枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与全血比例1：9。
2.避免标本在采集和处理过程中发生溶血。标本于15~25℃可保存4小时，-18℃以下可保存1个月。
3.血细胞比容（HCT）＞55%时，抗凝剂与血液的比例须按公式：抗凝剂（ml）＝（100% - HCT）×血液（ml）×0.001 85调整。
【方法与原理】
1.方法 乳胶凝集免疫法（透射比浊法）。
2.原理 DD5单克隆抗体与乳胶颗粒共价结合，该单克隆抗体能够与D-二聚体的交联部位结合，由于该部位的立体对称结构，使其具有多个抗原决定簇，抗原抗体结合形成较大的抗原抗体复合物，从而使系统的浊度增大，通过透射比浊法可以测定抗原（D-二聚体）的含量。
【仪器】
日本Sysmex公司CA7000或CA1500全自动凝血分析仪。
【试剂】
1.试剂 乳胶试剂为冻干粉，含鼠单克隆抗体，人血清白蛋白，两性离子缓冲剂（0.02mol/L），蔗糖（最大50g/L），叠氮钠（＜lg/L）。配制时，加入4ml缓冲液待溶解完全后，放置5分钟即可使用，上机前充分混匀。增速剂为冻干粉，由混合健康志愿者混合血浆添加标准D-Dimer参比液制备而成，HEPES缓冲液（12g/L）作稳定剂，配制时，加入5ml去离子水待溶解完全后，混匀30分钟即可使用。在说明书提供的配制后稳定时间内使用。
2.标准品 德国Siemens公司D-Dimer冻干标准血浆。
3.质控品 德国Siemens公司D-Dimer冻干质控血浆。
【参数设置】
1.标本体积：50μl。
2.增速剂体积：25μ1。
3.试剂体积：150μl。
4.标本预温时间：增速剂12秒，试剂36秒。
5.波长：575nm。
6.反应类型：免疫法，透射光比浊。
【操作步骤】
详细见PT检测。不同的是测定项目为“D-Dimer”。
【项目校准】
1.首先完成光源校准。然后按“Standard Curve”键，选择项目“D-Dimer”，再按“Analysis Setting”键，输入校准血浆名称、浓度、倍比稀释倍数和每一个点的测定次数，按“Return”键退出，再按“Set”键保存设置。
2.按“Worklist”键，再按“Standard Curve”键，在输入标本架的第一个位置出现校准血浆名称。
3.在标本架的第一个位置放上校准血浆，按“Start”键开始校准。
4.校准完成后，按“Standard Curve”键，再按“D-Dimer”选择项目，检查标准‘曲线是否良好，如果合格，按两次“Update”键存储；如果曲线不好，按“Update”键后，再按“No update”键清除。
【危急值报告】
D-二聚体≥1500μg/L，同时Fbg≤1.0g/L应及时报告临床医生。
【参考范围】
本实验室：0~420μg/L。
【性能参数】
1.精密度 批内重复性CV1.3%~3.0%，批间重复性CVO.8%~3.8%。
2.测定范围 20~1800μg/L。仪器自动稀释后可达9999.0μg/L。
3.干扰实验 单克隆抗鼠抗体可使检测结果升高或降低。
【临床意义】
血中FDP浓度增高，表示体内纤溶亢进，在恶性肿瘤、产科疾患、血管病变以及发生弥散性血管内凝血（DIC）时，FDP浓度有显著升高。它是DIC诊断以及溶栓治疗过程中的一个重要的监测指标。
【标本要求】
1.空腹取静脉血2.7ml，0.109mol/L枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与全血比例1：9。
2.避免标本在采集和处理过程中发生溶血。标本于4~8℃可保存24小时，-80℃可保存1个月。
3.血细胞比容（HCT）＞55%时，抗凝剂与血液的比例须按公式：抗凝剂（ml）=（100%-HCT）×血液（ml）×0.001 85调整。
【方法与原理】
1.方法 乳胶凝集免疫法（透射比浊法）。
2.原理 试剂中的FDP单克隆抗体与乳胶颗粒共价结合，当样品与试剂混合时，样品中的FDP与抗体结合形成抗原抗体复合物，使系统的浊度增大，透射光降低。连续监测575nm的透射光强度，当达到稳定的下降速率（线性期）时，其光度变化速率与抗原浓度成正比，据此可以测定抗原（FDP）的含量。
【仪器】
日本Sysmex公司CA7000或CA1500全自动凝血分析仪。
【试剂】
1.试剂 试剂1为30mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH8.5），试剂2为含鼠抗FDP单克隆抗体胶乳粒2.5mg/ml的液体试剂。
2.标准品 日本积水公司FDP冻干5水平标准血浆。
3.质控品 日本积水公司FDP冻干低值质控血浆和高值质控血浆。
【参数设置】
1.标本体积：10μl。
2.稀释缓冲液体积：12μl。
3.试剂体积：试剂1体积50μl，试剂2体积100μl。
4.标本预温时间：试剂1预温30秒，试剂2预温100秒。
5.波长：575nm。
6.反应类型：免疫法，透射光比浊。
【操作步骤】
详细见PT检测。不同的是测定项目为“FDP”。
【项目校准】
1.按“Standard Curve”键，选择项目“FDP”，再按“Analysis Setting”键，输入校准血浆名称、浓度、倍比稀释倍数和每一个点的测定次数，按“Return”键退出，再按“Set”键保存设置。
2.按“Worklist”键，再按“Standard Curve”键，在输入标本架的第一个位置出现校准血浆名称。
3.在标本架的第一个位置放上校准血浆，按“Start”键开始校准。
4.校准完成后，按“Standard Curve”键，再按“Fbg”选择项目，检查标准曲线是否良好，如果合格，按两次“Update”键存储；如果曲线不佳，按“Update”键后，再按“No update”键清除。
【危急值报告】
FDP测定值≥40μg/ml，同时Fbg≤1.0g/L应及时报告临床医生。
【参考范围】
本实验室：＜5μg/ml。
【性能参数】
1.精密度 CV＜10%。
2.测定范围2.5~120μg/ml。
3.干扰
（1）血浆总胆红素浓度高于307.8μmol/L。
（2）乳糜物浊度高于2800FTU浊度单位。
（3）溶血血红素浓度高于4.70g/L。
（4）类风湿因子浓度高于4701U/ml。
【临床意义】
APTT延长被纠正，说明原APTT异常是内源性凝血因子缺乏引起，可进一步检测凝血因子；APTT延长未被纠正，说明患者血浆内存在内源性凝血因子抑制物或其他抗凝物质，如狼疮抗凝物等。
【标本要求】
1.空腹取静脉血2.7ml，0.109mol/L枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与全血比例1：9。
2.采血后宜在2小时内完成检测，置4℃冰箱保存不可超过4小时。-20℃下可放置2周，-70℃下可放置6个月。
3.血细胞比容（HCT）＞55%时，抗凝剂与血液的比例须按公式：抗凝剂（ml）=（100%-HCT）×血液（ml）×0.001 85调整。
【方法与原理】
1.方法 凝固法（散射比浊法）。
2.原理 患者APTT试验结果与正常人相比显著延长，若加入正常人血浆后，试验结果可以纠正，则可证明其缺乏内源性凝血因子。本试验是鉴别内源系统凝血因子缺乏的筛选试验。
【仪器】
日本Sysmex公司CA7000或CA15 00全自动凝血分析仪。
【试剂】
同APTT测定。
【参数设置】
同APTT测定。
【操作步骤】
1.检查所取标本采血量是否合格（血量超过应抽血量的10%为血多，血量少于应抽血量的90%为血少），是否出现凝血、溶血等情况，不合格标本需要重新抽血送检。
2.将患者血浆与正常人血浆按1：1混匀，上机操作步骤同APTT测定。患者血浆测定值为纠正前结果，患者血浆与正常人血浆1：1混匀后测定值为纠正后结果。
【项目校准】
同APTT测定。
【性能参数】
同APTT测定。
【临床意义】
纠正后结果如在参考范围内，说明患者缺乏外源性凝血因子；如未在参考范围内，说明患者血浆内存在外源性凝血因子抑制物或其他抗凝物质（罕见）。
【标本要求】
1.空腹取静脉血2.7ml，0.109mol/L枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与全血比例1：9。
2.采血后宜在2小时内完成检测，置4℃冰箱保存不可超过4小时。-20℃下可放置2周，-70℃下可放置6个月。
3.在血细胞比容（HCT）＞55%时，抗凝剂与血液的比例须按公式：抗凝剂（ml）＝（100%-HCT）×血液（ml）×0.001 85调整。
【方法与原理】
1.方法凝固法（散射比浊法）。
2.原理患者PT试验结果与正常人相比显著延长，若加入正常人血浆后，试验结果可以纠正，则可证明其缺乏外源性凝血因子。本试验是鉴别外源系统凝血因子缺乏的筛选试验。
【仪器】
日本Sysmex公司CA7000或CA1500全自动凝血分析仪。
【试剂】
同PT测定。
【参数设置】
同PT测定。
【操作步骤】
1.检查所取标本采血量是否合格（血量超过应抽血量的10%为血多，血量少于应抽血量的90%为血少），是否出现凝血、溶血等情况，不合格标本需要重新抽血送检。
2.将患者血浆与正常人血浆按1：1混匀，上机操作步骤同PT测定。患者血浆测定值为纠正前结果，患者血浆与正常人血浆1：1混匀后测定值为纠正后结果。
【项目校准】
同PT测定。
【性能参数】
同PT测定。
【临床意义】
采集末梢血液是完成血常规检查的第一步，采血和抗凝的质量好坏将直接影响计数结果的准确性。
【材料与试剂】
一次性刺血针、EDTA-K2微量采血管、75%酒精棉棍、消毒干棉球。
【操作步骤】
1.采血部位 成人及儿童以手指指腹为好，婴幼儿可以取足底部内外侧缘。选择取血部位时应注意避开发炎、冻疮、水肿、伤口、淤青等部位。
2.采血前应叮嘱患者保持平静，如剧烈运动后、患者躁动、哭闹时应暂缓取血。正在输血的患者，应在输血后取血或从另一侧手指取血。
3.轻轻按摩采血部位，使局部组织自然充血，用75%的酒精棉棍进行局部消毒，自然干燥。
4.紧捏住采血部位，用一次性刺血针快速刺入皮肤，深度大约为2~3mm，以稍加挤压使第一滴血能够自然流出为好。
5.用消毒棉棍擦去第一滴血，稍加压力使血液从伤口处流出，用EDTA-K2微量采血管接取血液，取血量以200μl为佳，轻轻摇动试管，使血液与抗凝剂充分混合。
6.采血完毕后用消毒干棉球压住伤口止血。
7.末梢抗凝血应该在2小时内测定完毕。
【注意事项】
采血时注意严密消毒和生物安全防范，采血针、采血管一次性使用。采血时切忌用力挤压，以免混入组织液。血液流出后易凝固，采血动作要快。
【临床意义】
1.白细胞的生理性变化 年龄因素，如新生儿白细胞数量较高，出生1周后逐渐降低，后逐渐趋于稳定到正常水平。日间变化，一般人在安静时（例如，清晨）白细胞数较低，在活动和进餐后较高，下午高于清晨，日间白细胞数最高与最低值可相差近一倍。剧烈运动、体力劳动、冷热水浴后、紫外线照射、情绪激动均可使白细胞数增高。妇女妊娠中晚期、分娩后、月经期白细胞数量可呈生理性增加。
2.白细胞病理性增高 见于化脓性细菌感染，尿毒症，严重烧伤，传染性单核细胞增多症，急性出血，组织损伤，手术创伤后，白血病等。
3.白细胞病理性减低 病毒感染，伤寒，副伤寒，黑热病，疟疾，再生障碍性贫血，极度严重感染，放射线照射，化疗及非白血性白血病。
【标本要求】
1.EDTA-K2抗凝静脉血或末梢血。
2.预稀释的静脉血或末梢血。
【方法与原理】
1.方法 显微镜计数法。
2.原理 血液经过白细胞稀释液稀释后，红细胞被全部破坏，混合均匀后充人改良Neubauer计数板，在显微镜下计数，经计算得到单位体积内白细胞总数，进而换算得到每升血液内白细胞总数。
【仪器与材料】
显微镜、改良Neubauer计数板、小试管、20μ1定量取样器、加样器滴头、塑料滴管、500μl可调加样器。
【试剂】
白细胞稀释液：2%冰醋酸水溶液（冰乙酸2ml，10g/L亚甲蓝3滴，加蒸馏水至100ml）。
【操作步骤】
1.每次使用前应将计数盘和盖片擦洗干净，以免标本充人时受阻，影响血细胞分布的自然性和随机性。
2.用加样器吸取白细胞稀释液0.38ml，加于小试管内。
3.用20μl定量取样器吸取20μl血液标本，用吸水纸擦去管尖周围多余的血液，轻轻注入白细胞稀释液内，反复吸取稀释液清洗毛细吸管或滴头内壁2~3次，立即轻轻混匀，制备成1： 20倍的白细胞稀释悬液。
4.用滴管取少量混合均匀的稀释标本，充入计数板内，静置2~3分钟，待细胞下沉后，用10倍物镜计数4个大方格内的所有白细胞数量。注意充入计数盘时不能有气泡，不可有过多的稀释标本溢出计数池外。
5.计数时对压线细胞的处理方式，建议采用计数左上两边，不计数右下两边的方法。四个计数大方格之间的细胞数相差不应高于8个，两次计数的误差不超过10%。计数时可采用弓字形路线。
6.当白细胞分类中出现有核红细胞时，应该进行矫正计算以得到正确的白细胞总数。校准公式如下：
校正后白细胞数/1= [1001（100+有核红细胞数）]×校正前白细胞数
有核红细胞数为分类100个白细胞时见到的所有有核红细胞数量
7.结果判断 所计数4个大方格内的白细胞数量之和经过计算可得到每升血液内白细胞总数。计算公式：4个大方格内白细胞总数÷4×10×20×106＝白细胞数×l09/L。
（注：÷4表示换算为0.1mm3内白细胞平均数；×10表示换算为1mm3内白细胞总数；×20为稀释倍数换算；×106为换算成国际单位制）
【参考范围】
成人：4.0~10.0×109/L。
新生儿：15~20×l09/L。
6个月~2岁幼童：11~12×109/L。
（注：1995年北京市六家三甲医院联合调查2013例正常成年人静脉白细胞数参考范围为：3.4~9.55×l09/1，供参考）
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