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【医技】检验科医疗诊疗规范——第一篇 临床化学与免疫检验61-70
作者:王泓 日期:2014-06-19
【临床意义】
苯妥英钠是一种抗癫痫药物，主要用于治疗全身强直阵挛性发作（大发作），对部分发作也有效，对失神发作无效。血药浓度低于10μg/ml疗效不佳，高于20μg/ml会出现中毒反应，苯妥英钠的毒性主要是导致肾脏疾病，同时也会影响中枢神经系统，引起眼球震颤、眩晕、运动失调、精神变态甚至抽筋。长期治疗会导致牙龈增生、贫血和软骨病。
【标本要求】
1.空腹服药前（谷浓度）或服药后4~8小时（峰浓度）取静脉血3ml（血清或肝素、枸橼酸钠、草酸盐/氟化钠、EDTA抗凝血浆）。
2.血清/血浆分离后2~8℃可稳定24小时。
3.分离胶能够引起苯妥英钠浓度降低，其降低幅度取决于样本存留于试管中的时间，因此带分离胶的采血管不能用于苯妥英钠测定。
【方法与原理】
1.方法 竞争结合法，荧光偏振免疫分析（FPIA）。
2.原理 样本中的苯妥英钠（被分析物）、荧光标记的苯妥英钠（标记物）和抗苯妥英钠抗体同时加入反应杯中。样本中的苯妥英钠和试剂中标记的苯妥英钠与苯妥英钠抗体竞争性结合，如果样本中苯妥英钠含量高，则未结合的标记物多，如果样本中苯妥英钠含量低，则未结合的标记物少（参见图1-1）。
未结合的标记物分子较小，当被偏振光激发时快速转动，不能够发出统一方向的荧光，因此偏振光读数降低（参见图1-2）。
与抗体结合的标记物分子较大，当被偏振光激发时转动速度很慢，能够发出单一方向的荧光，因此偏振光读数升高（参见图1-3）。
AxSYM系统通过测定与抗体结合的标记物所发出的偏振荧光的变化量，达到检测标本中苯妥英钠含量的目的。偏振光变化量越大，被测药物的浓度越低。
【仪器】
Abbott AxSYM全自动免疫分析仪。
【试剂】
1.试剂厂商 Abbott。
2.试剂
（1）主要套装试剂
1）苯妥英钠抗体（14.5ml 1瓶）：1%羊抗苯妥英钠多克隆抗体，基质为磷酸缓冲液，含蛋白稳定剂和叠氮钠。
2）前处理溶液（8.6ml 1瓶）：含表面活性剂的Tris缓冲液，叠氮钠作为防腐剂。
3）苯妥英钠荧光标记物（15.1ml 1瓶）：0.01%苯妥英钠荧光标记物，基质为Tris缓冲液，含表面活性剂和叠氮钠。
（2）其他辅助试剂
1）探针清洗液：仪器探针清洗液（220ml两瓶）：含2%的氢氧化四乙胺（TEAH），15~30℃保存。
2）溶液4稀释液（10L 1瓶）：含0.1mol/L磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗微生物剂。15~30℃保存。
3.套装试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，不得冻存，开盖后试剂在仪器上的稳定期是336小时。
4.质控品 Bio-Rad公司Liquichek人血清未定值临床化学控制品，691及692两个水平。
5.校准品 Abbott公司单项校准液（7A67-01），靶值参见不同批号说明书。
【参数设置】
1.测定全称：Phenytoin
2.测定简称：Pheny
3.测定编号：623
4.测定版本：1
5.校准版本：00
6.测定文件修正版：500
7.测定开启：ON
8.测定方式：FPIA
9.校准品测定次数：2
10.Cal A浓度：0.00
11.Cal B浓度：2.50
12.Cal C浓度：5.00
13.Cal D浓度：10.00
14.Cal E浓度：20.00
15.Cal F浓度：40.00
16.默认稀释方式：不稀释
17.默认校准方法：标准方式
18.结果浓度单位：μg/ml
19.结果小数点位置：2
20.最大背景强度：28600.0000
21.最小强度：28600.0000
22.治疗浓度下限：10.00
23.治疗浓度上限：20.00
24.测定最小值：0.75
25.测定最大值：400.00
26.采用不稀释方式的最低浓度：0.00
27.采用不稀释方式的最高浓度：40.00
28.采用第一稀释方式的最低浓度：1.20
29.采用第一稀释方式的最高浓度：80.00
30.采用第二稀释方式的最低浓度：2.60
31.采用第二稀释方式的最高浓度：160.00
【项目校准】
1.更换试剂批号后，应校准。
2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
【性能参数】
1.精密度 批内变异2.0~2.2%，总变异3.3~3.6%。
2.准确度 回收率平均为101.5%±3.9%。
3.灵敏度最低检测限0.50μg/ml
4.特异性
（1）苯妥英钠浓度分别为10μg/ml和20μg/ml，苯妥英钠的主要代谢产物5一（4-羟苯基）-5苯基-乙内酰脲（p-HPPH）浓度为5μg/ml时，苯妥英钠测定值变化小于0.3μg/ml； p-HPPH葡糖苷酸浓度为100μg/ml时，苯妥英钠测定值变化小于0.7μg/ml。
（2）高浓度的美芬妥英和其主要代谢产物5-乙基-5苯基-乙内酰脲，苯妥英钠测定值低于检测限。
（3）噁丙嗪与苯妥英钠的交叉反应率小于1%。
（4） Fosphenytoin对苯妥英钠测定的干扰取决于采血时间，接受Fospheny-t01n静脉注射的患者需在注射后至少2小时采血，而接受肌肉注射的患者则需在至少4小时后采血，才不会对苯妥英钠测定产生干扰。
5.干扰物质 血液中胆红素含量15mg/dl，血红蛋白含量1.0g/dl，甘油三酯含量900mg/dl，总蛋白含量10.0g/dl，对苯妥英钠测定的干扰率小于10%。尿毒症患者样本对测定有正干扰。
6.相关性 与雅培TDx/TDxFLx Phenytoin的相关系数为0.998。
【有效治疗浓度】
10~20μg/ml。
【临床意义】
丙戊酸是一种抗癫痫药物，用于治疗全身失神性发作，对全身强直阵挛性、单纯部分性和肌阵挛性发作也有效。治疗浓度个体差异很大，需根据患者具体情况合理用药。16%的成人和超过22%的儿童主要不良反应表现为恶心、呕吐和腹泻等消化道症状；中枢神经系统的症状较轻，并可通过降低药量消除；最严重的毒性反应是肝脏中毒，且严重程度与血药浓度相关。
【标本要求】
1.空腹服药前（谷浓度）或服药后2~8小时（峰浓度）取静脉血3ml（血清或肝素、枸橼酸钠、草酸盐/氟化钠、EDTA抗凝血浆）。
2.血清/血浆分离后2~8℃可稳定24小时。
【方法与原理】
1.方法 竞争结合法、荧光偏振免疫分析（FPIA）。
2.原理 样本中的丙戊酸（被分析物）、荧光标记的丙戊酸（标记物）和抗丙戊酸抗体同时加入反应杯中。样本中的丙戊酸和试剂中标记的丙戊酸与丙戊酸钠抗体竞争性结合，如果样本中丙戊酸含量高，则未结合的标记物多，如果样本中丙戊酸含量低，则未结合的标记物少（参见图1-1）。
未结合的标记物分子较小，当被偏振光激发时快速转动，不能够发出统一方向的荧光，因此偏振光读数降低（参见图1-2）。
与抗体结合的标记物分子较大，当被偏振光激发时转动速度很慢，能够发出单一方向的荧光，因此偏振光读数升高（参见图1-3）。
AxSYM系统通过测定与抗体结合的标记物所发出的偏振荧光的变化量，达到检测标本中丙戊酸含量的目的。偏振光变化量越大，被测药物的浓度越低。
【仪器】
Abbott AxSYM全自动免疫分析仪。
【试剂】
1.试剂厂商 Abbott。
2.试剂
（1）主要套装试剂
1）丙戊酸抗体（14.5ml 1瓶）：25%羊抗丙戊酸多克隆抗体，基质为磷酸缓冲液，含蛋白稳定剂和叠氮钠。
2）前处理溶液（8.6ml 1瓶）：溶解于Tris缓冲液的表面活性剂，叠氮钠作为防腐剂。
3）丙戊酸荧光标记物（15.Iml 1瓶）：0.01%丙戊酸钠荧光标记物，基质为Tris缓冲液，含表面活性剂和叠氮钠。
（2）其他辅助试剂
1）探针清洗液：仪器探针清洗液（220ml两瓶）：含2%的氢氧化四乙胺（TEAH），15~30℃保存。
2）溶液4稀释液（10L 1瓶）：含0.1mol/L磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗微生物剂。15~30℃保存。
3.套装试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，不得冻存，开盖后试剂在仪器冷藏位上的稳定期是336小时。
4.质控品 Bio-Rad公司Liquichek人血清未定值临床化学控制品，691及692两个水平。
5.校准品 Abbott公司单项校准液（7A71-01），靶值参见不同批号说明书。
【参数设置】
1.测定全称：Valproic Acid
2.测定简称：Valp
3.测定编号：689
4.测定版本：1
5.校准版本：00
6.测定文件修正版：400
7.测定开启：ON
8.测定方式：FPIA
9.校准品测定次数：2
10.Cal A浓度：0.00
11.Cal B浓度：12.50
12.Cal C浓度：25.00
13.Cal D浓度：50.00
14.Cal E浓度：100.00
15.Cal F浓度：150.00
16.默认稀释方式：不稀释
17.默认校准方法：标准方式
18.结果浓度单位：μg/ml
19.结果小数点位置：2
20.最大背景强度：9500.0000
21.最小强度：19 300.0000
22.治疗浓度下限：50.00
23.治疗浓度上限：100.00
24.测定最小值：1.05
25.测定最大值：1500.00
26.采用不稀释方式的最低浓度：0.00
27.采用不稀释方式的最高浓度：150.00
28.采用第一稀释方式的最低浓度：20.00
29.采用第一稀释方式的最高浓度：300.00
30.采用第二稀释方式的最低浓度：40.00
31.采用第二稀释方式的最高浓度：600.00
【项目校准】
1.更换试剂批号后，应校准。
2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
【性能参数】
1.精密度 批内变异3.4%~4.1%，总变异4.0%~4.7%。
2.准确度 回收率平均为98.3%±2.0%。
3.灵敏度 最低检测限0.70μg/ml（95%置信区间）。
4.特异性 丙戊酸的主要代谢产物3-酮丙戊酸达16μg/ml，丙戊酸浓度分别为50μg/ml和100μg/ml时，丙戊酸测定值的变化小于10%。其他代谢产物如3-羟基丙戊酸、4-羟基丙戊酸、4-烯丙戊酸、2-丙基戊二酸和5-羟基丙戊酸在高浓度时，丙戊酸测定值低于检测限。
5.干扰物质 血液中胆红素含量20mg/dl，血红蛋白含量1.0g/dl，甘油三酯含量llOOmg/dl，总蛋白含量2.0~10.0g/dl，对丙戊酸测定的干扰率小于10%。
6.相关性 与雅培TDx/TDxFLx Valproic Acid的相关系数为0.983。
【有效治疗浓度】
50~100μ/ml。
【临床意义】
茶碱是一种抗哮喘药，主要用于治疗支气管哮喘，以及早产儿阵发性呼吸暂停和急性心力衰竭导致的急性肺水肿。血药浓度低于10μg/ml疗效不佳；高于20μg/ml，可出现头晕、头痛、腹泻、呕吐、消化道出血、癫痫发作和心律失常。
【标本要求】
1.空腹服药前（谷浓度）或服药后2~3小时（峰浓度）取静脉血3ml（血清或肝素、枸橼酸钠、草酸盐/氟化钠、EDTA抗凝血浆）。
2.血清/血浆分离后2~8℃可稳定24小时，-10℃以下可稳定168小时。
【方法与原理】
1.方法 竞争结合法、荧光偏振免疫分析（FPIA）。
2.原理 样本中的茶碱（被分析物）、荧光标记的茶碱（标记物）和抗茶碱抗体同时加入反应杯中。样本中的茶碱和试剂中标记的茶碱与茶碱抗体竞争性结合，如果样本中茶碱含量高，则未结合的标记物多，如果样本中茶碱含量低，则未结合的标记物少（参见图1-1）。
未结合的标记物分子较小，当被偏振光激发时快速转动，不能够发出统一方向的荧光，因此偏振光读数降低（参见图1-2）。
与抗体结合的标记物分子较大，当被偏振光激发时转动速度很慢，能够发出单一方向的荧光，因此偏振光读数升高（参见图1-3）。
AxSYM系统通过测定与抗体结合的标记物所发出的偏振荧光的变化量，达到检测标本中茶碱含量的目的。偏振光变化量越大，被测药物的浓度越低。
【仪器】
Abbott AxSYM全自动免疫分析仪。
【试剂】
1.试剂厂商 Abbott。
2.试剂
（1）主要套装试剂
1）抗茶碱抗体（14.5ml 1瓶）：含0.05%鼠抗茶碱单克隆抗体，基质为磷酸缓冲液，含蛋白稳定剂和叠氮钠作防腐剂。
2）前处理溶液（8.6ml 1瓶）：含表面活性剂的Tris缓冲液，叠氮钠作防腐剂。
3）茶碱荧光标记物（15.1ml 1瓶）：含0.01%的茶碱荧光标记物，基质为Tris缓冲液，叠氮钠作防腐剂。
（2）其他辅助试剂
1）探针清洗液：仪器探针清洗液（220ml两瓶）：含2%的氢氧化四乙胺（TEAH），15~30℃保存。
2）溶液4稀释液（10L 1瓶）：含0.1mol/L磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗微生物剂。15~30℃保存。
3.套装试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，不得冻存。开盖后试剂在仪器冷藏位上的稳定期是336小时。
4.质控品 Bio-Rad公司Liquichek人血清未定值临床化学控制品，691及692两个水平。
5.校准品 Abbott公司单项校准液（5874-01），靶值参见不同批号说明书。
【参数设置】
1.测定全称：Theophylline Ⅱ
2.测定简称：Theo Ⅱ
3.测定编号：613
4.测定版本：1
5.校准版本：00
6.测定文件修正版：200
7.测定开启：ON
8.测定方式：FPIA
9.校准品测定次数：2
10.Cal A浓度：0.00
11.Cal B浓度：2.50
12.Cal C浓度：5.00
13.Cal D浓度：10.00
14.Cal E浓度：20.00
15.Cal F浓度：40.00
16.默认稀释方式：不稀释
17.默认校准方法：标准方式
18.结果浓度单位：μg/ml
19.结果小数点位置：2
20.最大背景强度：30 000.0000
21.最小强度：22 000.0000
22.治疗浓度下限：10.00
23.治疗浓度上限：20.00
24.测定最小值：1.64
25.测定最大值：400.00
26.采用不稀释方式的最低浓度：0.00
27.采用不稀释方式的最高浓度：40.00
28.采用第一稀释方式的最低浓度：1.80
29.采用第一稀释方式的最高浓度：80.00
30.采用第二稀释方式的最低浓度：3.60
31.采用第二稀释方式的最高浓度：160.00
【项目校准】
1.更换试剂批号后，应校准。
2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
【性能参数】
1.精密度 批内变异1.7%~2.5%，总变异1.9%~2.6%。
2.准确度 回收率平均为97.0%±0.9%。
3.灵敏度 最低检测限0.82μg/ml（95%置信区间）。
4.特异性 高浓度的咖啡因、8-氯茶碱、1，3二甲基尿酸、双羟丙茶碱、1-甲基尿酸、1-甲基黄嘌呤、可可碱和类黄嘌呤血浆，其茶碱测定值低于检测限，因此这些物质对测定不产生干扰。3-甲基黄嘌呤的浓度达8μg/ml时，茶碱含量为7.0μg/ml和26.0μg/ml的样本，茶碱测定值变化1.9μg/ml。
5.干扰物质 血液中胆红素含量20mg/dl，血红蛋白含量1.0g/dl，甘油三酯含量1000mg/dl，总蛋白含量3.0~10.0g/dl，对茶碱测定的干扰率小于10%。
6.相关性 与雅培AxSYM Theophylline、TDx/TDxFLx TheophyllineMono Ⅱ和高效液相色谱（HPLC）的相关系数均为0.99。
【有效治疗浓度】
10~20μg/ml。
【临床意义】
地高辛是强心苷类药物，主要用于治疗充血性心力衰竭和室上性心律失常，对心房扑动，快速房颤、阵发性房性心动过速等心律失常有效。血药浓度低于0.5ng/ml疗效不佳，高于2.00ng/ml为地高辛中毒，可出现消化道症状如恶心、呕吐和腹泻，神经系统症状如视力模糊、头痛，还可出现心律失常和脉搏降低。
合理的治疗浓度除了要考虑血地高辛浓度外，还要考虑患者的年龄、甲状腺功能、酸碱平衡、肾脏功能和是否使用其他药物等临床因素。低血钾、高血钙、高血钠、低血镁时，心肌对地高辛的敏感度提高，要适当降低地高辛用量。地高辛和奎尼丁合用可使血清地高辛浓度上升2.5倍，因此应减少剂量。
【标本要求】
1.空腹服药前（谷浓度）或服药后至少6小时取静脉血3ml（血清或肝素锂、肝素钠、枸橼酸、EDTA或草酸盐抗凝血浆）。
2.血清/血浆分离后2~8℃可稳定24小时，-10℃以下可稳定168小时。
3.接受坎利酸钾或皮质激素静脉注射治疗的患者，要在注射前抽血。
【方法与原理】
1.方法 双抗体夹心法、微粒体酶免疫法（MEIA）。
2.原理 样本中的地高辛与包被有抗地高辛抗体的微粒子结合，形成“微粒子一抗体一地高辛”复合物，该过程在反应杯内进行（图1-4）。
上述“微粒子-抗体-地高辛”复合物移至纤维杯内，微粒子与纤维杯内壁发生不可逆结合，即“纤维杯-微粒子-抗地高辛抗体-地高辛”。随后在纤维杯内加入碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体，形成“纤维杯-微粒子-抗地高辛抗体-地高辛一抗地高辛抗体一碱性磷酸酶”的结合，如图1-5。
通过洗涤纤维杯，洗去未结合的成分。在纤维杯内加入反应底物，4-甲基伞形酮酰磷酸盐（4-methylumbelliferyl phosphate），碱性磷酸酶催化底物转化为荧光物质，即4-甲基伞形酮（4-methylumbelliferone）。MEIA检测系统检测荧光强度，其大小与地高辛浓度呈正相关（图1-6）。
【仪器】
Abbott AxSYM全自动免疫分析仪。
【试剂】
1.试剂厂商Abbott。
2.试剂
（1）主要套装试剂
1）碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体（15 ml 1瓶）：最低浓度0.05μg/ml，基质为Tris缓冲液，含蛋白稳定剂、叠氮钠和抗微生物剂。
2）（兔）抗地高辛抗体包被的微粒子（7.6ml 1瓶）：最低浓度0.0001%，基质为Tris缓冲液，含蛋白稳定剂，叠氮钠作为防腐剂。
3） MEIA缓冲液（27ml 1瓶）：Tris缓冲液，含氯化钠0.3mol/L和叠氮钠、抗微生物剂。
4）地高辛探针清洗液（41.9ml 1瓶）：含氯化钠溶液2.0mol/L，叠氮钠作为防腐剂。
（2）其他辅助试剂
1）仪器探针清洗液（220ml两瓶）：含2%的氢氧化四乙胺（TEAH），15~30℃保存。
2）溶液1MUP（230ml 4瓶）：即底物溶液，含1.2mmol/L 4-甲基伞形酮酰磷酸盐（MUP），基质为AMP缓冲液，防腐剂为叠氮钠。2~8℃冰箱保存，不得冻存。自冰箱取出后立即使用，并需立即旋紧盖子以防与空气接触。在仪器上的最长累计运行时间为14天，超过这个时间，试剂失效。
3）溶液3纤维杯清洗液（lOOOml 4瓶）：含0.3mol/L氯化钠，基质为Tris缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗微生物剂。15~30℃保存。
4）溶液4稀释液（10L 1瓶）：含0.1mol/L磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗微生物剂。15~30℃保存。
5）反应杯（100个）。
6）纤维杯（100个）。
3.套装试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，不得冻存，开盖后试剂在仪器上的稳定期是224小时。
4.质控品 Bio-Rad公司Liquichek人血清未定值临床化学控制品，691及692两个水平。
5.校准品 Abbott公司单项校准液（6L07-01），靶值参见不同批号说明书。
【参数设置】
1.测定全称：Digoxin-Ⅱ
2.测定简称：Didoxin
3.测定编号：601
4.测定版本：1
5.校准版本：00
6.测定文件修正版：200
7.测定开启：ON
8.测定方式：MEIA
9.校准品测定次数：2
10.Cal A浓度：0.00
11.Cal B浓度：0.50
12.Cal C浓度：1.00
13.Cal D浓度：2.00
14.Cal E浓度：3.00
15.Cal F浓度：4.00
16.默认稀释方式：不稀释
17.默认校准方法：标准方式
18.结果浓度单位：ng/ml
19.结果小数点位置：2
20.MUP最大截距：12 000.0000
21.MUP最小截距：1500.0000
22.低速率反应的最大NRMSE：0.19
23.高速率反应的最大NRMSE：0.14
24.检查最小MUP截距的最大速率：1100.0000
25，用于计算NRMSE和相关系数的速率临界值（Cut-off）：250.0000
26.低速率反应的最小相关系数：0.98
27.高速率反应的最小相关系数：0.98
28.加入MUP到读数的延迟时间：2.3000
29.治疗浓度下限：0.90
30.治疗浓度上限：2.00
31.测定最小值：0.30
32.测定最大值：40.00
33.采用不稀释方式的最低浓度：0.00
34.采用不稀释方式的最高浓度：4.00
【项目校准】
1.更换试剂批号后，应校准。
2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
【性能参数】
1.精密度 批内变异3.2%~6.0%，总变异3.7%~7.3%。
2.准确度 平均回收率为102.0%±3.0%。
3.灵敏度 0.3ng/ml（95%置信区间）。
4.特异性 高浓度的地高辛代谢产物毛地黄毒苷、单毒糖毛地黄毒苷、双毒糖毛地黄毒苷的地高辛测定值分别为0.132ng/ml、0.088ng/ml和0.22ng/ml，均低于测定灵敏度，说明其对地高辛测定的干扰可以忽略。毛地黄毒苷浓度为25ng/ml时，空白血地高辛测定值为0.56ng/ml；毛地黄毒苷浓度25nglml，地高辛浓度为0.9~2.2ng/ml时，地高辛测定值升高0.50ng/ml。
（1）干扰物质
1）某些激素对地高辛测定有负干扰，如安体舒通（螺内酯）浓度为509nglml时，干扰率为-17%；坎利酮浓度为582ng/ml时，干扰率为-33%；氢化可的松浓度为5000ng/ml时，干扰率为-22%；泼尼松龙浓度为4900ng/ml时，干扰率为-15%；地塞米松浓度为4800ng/ml时，干扰率为-23%；黄体酮浓度为500ng/ml时，干扰率为-32%。
2）胆红素含量为20mg/dl，血红蛋白含量750mgdl，甘油三酯含量2500μg/dl，蛋白含量3.0~12.Og/dl时，对地高辛测定的干扰率小于10%。
（2）相关性：与雅培公司的IMx Digoxin的相关系数为0.98，与AxSYM Di-goxin的相关系数为0.93，与TDx/TDxFLx Digoxin II的相关系数为0.95，与德灵公司Dade aca Digoxin的相关系数为0.96。
【有效治疗浓度】
0.80~2.00ng/ml。
【临床意义】
环孢霉素A的药理作用：环孢霉素A是一种来源于真菌的十一肽，它可以通过抑制白介素一Ⅱ，封闭抗原介导的信号传递到细胞合成部位，从而抑制致敏的T淋巴细胞的增殖和对异体抗原作出反应的能力。
环孢霉素A的吸收和代谢：环孢霉素A可静脉注射或口服，消化道吸收不规律、不完全。治疗期间生物利用度会增加，故应逐渐减少剂量以维持血药浓度的稳定。环孢霉素A通过肝脏的细胞色素P450代谢，目前确定至少有三十个代谢产物，其代谢产物的免疫抑制作用和毒性都低于母药。
药物的相互作用：许多药物可以影响环孢霉素A的血药浓度，这些药物包括达那唑、地尔硫革、红霉素、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、甲氧氯普胺、尼卡地平、维拉帕米、卡马西平、苯巴比妥、苯妥英钠、利福平和复方磺胺甲噁唑，它们的作用方式是诱导其代谢或影响其吸收。
TDM的意义：低于有效治疗浓度可能造成移植器官的排异反应，高于有效治疗浓度可能造成严重感染及肾脏和肝脏的损害（肾毒性和肝毒性）。药物不良反应包括腹泻、齿龈增生、恶心呕吐、多毛症、颤抖和高血压等。
【标本要求】
1.空腹服药前（谷浓度）或服药后2小时（峰浓度）取静脉血2~5ml（EDTA或肝素抗凝全血）。
2.全血标本2~8℃可稳定28天，超过28天需冻存。
3.肝素管的全血标本在储存过程中会产生微凝块，干扰检测结果。
【方法与原理】
1.方法 竞争结合法、荧光偏振免疫分析（FPIA）。
2.原理 经过处理的样本中的环孢霉素A（被分析物）、荧光标记的环孢霉素A（标记物）和抗环孢霉素A抗体同时加入反应杯中。样本中的环孢霉素A和试剂中标记的环孢霉素A与环孢霉素A抗体竞争性结合，如果样本中环孢霉素A含量高，则未结合的标记物多，如果样本中环孢霉素A含量低，则未结合的标记物少（参见图1-1）。
未结合的标记物分子较小，当被偏振光激发时快速转动，不能够发出统一方向的荧光，因此偏振光读数降低（参见图1-2）。
与抗体结合的标记物分子较大，当被偏振光激发时转动速度很慢，能够发出单一方向的荧光，因此偏振光读数升高（参见图1-3）。
AxSYM系统通过测定与抗体结合的标记物所发出的偏振荧光的变化量，达到检测标本中环孢霉素A含量的目的。偏振光变化量越大，被测药物浓度越低。
【仪器】
Abbott AxSYM全自动免疫分析仪。
【试剂】
1.试剂厂商Abbott。
2.试剂
（1）主要套装试剂
1）环孢霉素A抗体（4.6ml 1瓶）：含＜25%的鼠抗环孢霉素A单克隆抗体，基质为枸橼酸缓冲液，含有蛋白稳定剂，叠氮钠作为防腐剂。
2）前处理溶液（4.3ml 1瓶）：含表面活性剂的Tris缓冲液，叠氮钠作防腐剂。 3）环孢霉素A荧光标记物（10.5ml 1瓶）：含＜0.01%的环孢霉素A荧光标记物，基质为含有表面活性剂和蛋白稳定剂的磷酸缓冲液，叠氮钠作防腐剂。
4）环孢霉素A样品提取沉淀剂（33ml 1瓶）：硫酸锌甲醇溶液和乙烯乙二醇。
5）环孢霉素A样品提取助溶剂（5ml 1瓶）：表面活性剂水溶液，叠氮钠作防腐剂。
（2）其他辅助试剂
1）探针清洗液：仪器探针清洗液（220ml两瓶）：含2%的氢氧化四乙胺（TEAH），15~30℃保存。
2）溶液4稀释液（10L 1瓶）：含0.1mol/L磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗微生物剂。15~30℃保存。
3.套装试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，不得冻存，开盖后试剂在仪器上的稳定期是336小时。
4.质控品 Abbott公司配套控制品（250-1/2/3/4），三个水平。
5.校准品 Abbott公司单项校准液（8K18-01），靶值参见不同批号说明书。
【参数设置】
1.测定全称：Cyclosporine
2.测定简称：Cyclo
3.测定编号：693
4.测定版本：1
5.校准版本：00
6.测定文件修正版：500
7.测定开启：ON
8.测定方式：FPIA
9.校准品测定次数：2
10.Cal A浓度：0.0
11.Cal B浓度：40.0
12.Cal C浓度：100.0
13.Cal D浓度：200.0
14.Cal E浓度：400.0
15.Cal F浓度：800.0
16.默认稀释方式：不稀释
17.默认校准方法：标准方式
18.结果浓度单位：ng/ml
19.结果小数点位置：1
20.最大背景强度：30 000.0000
21.最小强度：10 600.0000
22.治疗浓度下限.x
23.治疗浓度上限：
*24.测定最小值：21.8
25.测定最大值：8000.0
26.采用不稀释方式的最低浓度：20.0
27.采用不稀释方式的最高浓度：800.0
【样本提取和测定】
1.样本（包括校准液、质控品和患者标本）置于室温下复温至15~30℃，颠倒混匀，避免剧烈振荡产生气泡。
2.取全血150μ置于塑料离心管底部，再顺序取50μl助溶剂和300μl沉淀剂沿管壁加入塑料离心管中，立即盖上离心管盖（提取液易挥发）。
3.在涡旋混匀器上振荡20秒，室温放置5分钟，12 000转/分钟离心5分钟，倒出上清液，立即上机分析。
【项目校准】
1.更换试剂批号后，应校准。
2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
4.样品浓度高于800ng/ml时，用校准液的CAIA 3倍稀释后，重新提取测定。
【性能参数】
1.精密度批内变异4.9%~7.6%，批间变异1.1%~3.0%，日间变异1.1%~3.1%，总变异5.9%~8.5%。
2，准确度 回收率为90.3%~102.3%。
3.灵敏度 最低检测限23.2ng/m1（21.1~26.0nglml，95%置信区间）。
4.特异性 与环孢霉素的主要代谢产物AMl（M17）的交叉反应率为6.9%（0.1%~ii.126）， AM9为14.3%（9.7%~19.1%）， AMlcb（M18）、AM4N（M21）和AM19 （M8）的交叉反应率低于5%。
5.干扰物质 内源性物质总胆红素浓度40mg/dl、血红蛋白20g/dl、甘油三酯3g/dl、总蛋白2.8~13g/dl，对药物测定的干扰小于10%。
6.相关性 与HPLC方法的相关系数为0.931（0.908~0.955）。
【有效治疗浓度】
未定，随移植器官和治疗时期不同而有所不同。
【临床意义】
甲氨蝶呤是一种抗肿瘤药物，大剂量MTX主要用于骨肉瘤、白血病、非霍奇金淋巴瘤以及肺癌和乳腺癌的冲击治疗，TDM的目的在于监测叶酸解救效果以及决定是否应该增加叶酸剂量。低剂量MTX用于治疗严重的银屑病、哮喘、类风湿性关节炎、结节病和器官移植后。
【标本要求】
1.静脉输注后，对侧取静脉血2ml（血清或EDTA、肝素、草酸钾/氟化钠抗凝血浆）。
2.标本应避光保存。
3.采血时间可依据患者的输注剂量、耐受程度和临床症状决定。
【方法与原理】
1.方法 竞争结合法、荧光偏振免疫分析（FPIA）。
2.原理 样本中的甲氨蝶呤（被分析物）、荧光标记的甲氨蝶呤（标记物）和抗甲氨蝶呤抗体同时加入反应杯中。样本中的甲氨蝶呤和试剂中标记的甲氨蝶呤与甲氨蝶呤抗体竞争性结合，如果样本中甲氨蝶呤含量高，则未结合的标记物多，如果样本中甲氨蝶呤含量低，则未结合的标记物少（参见图1-1）。
未结合的标记物分子较小，当被偏振光激发时快速转动，不能够发出统一方向的荧光，因此偏振光读数降低（参见图1-2）。
与抗体结合的标记物分子较大，当被偏振光激发时转动速度很慢，能够发出单一方向的荧光，因此偏振光读数升高（参见图1-3）。
AxSYM系统通过测定与抗体结合的标记物所发出的偏振荧光的变化量，达到检测标本中甲氨蝶呤含量的目的。偏振光变化量越大，被测药物的浓度越低。
【仪器】
Abbott TDx药物浓度分析仪。
【试剂】
1.试剂厂商 Abbott。
2.试剂
（1）W（4m1）：洗液和溶剂，含叠氮钠。
（2）S（4ml）：缓冲液基质的甲氨蝶呤抗体（鼠单抗），浓度＜0.01%，含蛋白稳定剂和叠氮钠。
（3）T（3.5m1）：缓冲液基质的甲氨蝶呤荧光标记物，浓度＜0.01%，含表面活性剂、蛋白稳定剂和叠氮钠。
（4）P（3.5m1）：前处理液，缓冲液基质的表面活性剂，含蛋白稳定剂和叠氮钠。
3.试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，不得冻存，开盖后试剂可保存至效期。
4.质控品 Abbott公司配套控制品（5875-10），两个水平。
5.校准品 Abbott公司单项校准液（7A12-01），靶值参见不同批号说明书。
【参数设置】
1.测定全称：Methotrexate
2.测定简称：MTX
3.测定编号：22
4.测定程序号：43（不稀释），42（高倍稀释）
5.稀释后样品体积：10μl
6.稀释前样品体积：50μl、80μl（高倍稀释）
7.测定次数：1次
8.测定低限：0
9.测定高限：1000μmol/L（高倍稀释）
10，校准样品体积：10μl
11.校准品测定次数：2
12.Cal A浓度：0.00
13.Cal B浓度：0.05
14.Cal C浓度：0.15
15.Cal D浓度：0.30
16.Cal E浓度：0.60
17.Cal F浓度：1.00
18.默认稀释方式：不稀释
19.结果浓度单位：μmol/L
20.最大背景强度：2500.00
【项目校准】
1.更换试剂批号后，应校准。
2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
【性能参数】
1.精密度 总变异（n=80）14.0%（0.07μmol/L）、5.4%co.40μmol/L）、5.9%（0.80μmol/L）、5.6%（5μmol/L）、5.9% （50μmol/L）和5.5%（500μmol/L）。
2.准确度 回收率为96.49%~103.57%。
3.灵敏度 最低检测限0.02μmol/L（95%置信区间）。
4.特异性 甲氨蝶呤的主要代谢产物7一羟基甲氨蝶呤对测定无干扰；代谢产物DAMPA（4-[[2，4-diamino-6-（pteridinyl） methyl]-methylamino]-benzoic acid）对测定有干扰，当母药和DAMPA的血清浓度均为5μmol/L时，甲氨蝶呤测定值升高26%，若DAMPA浓度达1000μmol/L时，甲氨蝶呤测定值升高59%。
5.相关性 与HPLC方法的相关系数为0.999。
【有效治疗浓度】
以50m2g/m2~15g/m2的剂量静脉输注4~6小时，24小时后血清MTX浓度高于5~10μmol/L，48小时高于0.5~1.0μmol/L，72小时高于0.2μmol/L时，即需增加叶酸解救剂量。MTX浓度约为0.02μmol/L时，DNA合成基本恢复正常。
【临床意义】
卡马西平是一种抗癫痫药物，对控制癫痫大发作、精神运动性发作、局限性发作及混合型癫痫均有效，其中对精神运动性发作疗效最好。血药浓度低于4μg/ml疗效不佳，高于12μg/ml会出现卡马西平中毒。常见的中毒症状有轻度嗜睡、视力模糊、头晕头痛等，严重的副作用是可以抑制骨髓功能，导致再生障碍性贫血，但很少见。
【标本要求】
1.空腹服药前（谷浓度）或服药后3小时（峰浓度）取静脉血3ml（血清或肝素、枸橼酸钠、草酸盐/氟化钠、EDTA抗凝血浆）。
2.血清/血浆分离后2~8℃可稳定24小时。
【方法与原理】
1.方法 竞争结合法、荧光偏振免疫分析（FPIA）。
2.原理 样本中的卡马西平（被分析物）、荧光标记的卡马西平（标记物）和抗卡马西平抗体同时加入反应杯中。样本中的卡马西平和试剂中标记的卡马西平与卡马西平抗体竞争性结合，如果样本中卡马西平含量高，则未结合的标记物多，如果样本中卡马西平含量低，则未结合的标记物少（参见图1-1）。
未结合的标记物分子较小，当被偏振光激发时快速转动，不能够发出统一方向的荧光，因此偏振光读数降低（参见图1-2）。
与抗体结合的标记物分子较大，当被偏振光激发时转动速度很慢，能够发出单一方向的荧光，因此偏振光读数升高（参见图1-3）。
AxSYM系统通过测定与抗体结合的标记物所发出的偏振荧光的变化量，达到检测标本中卡马西平含量的目的。偏振光变化量越大，被测药物的浓度越低。
【仪器】
Abbott AxSYM全自动免疫分析仪。
【试剂】
1.试剂厂商Abbott。
2.试剂
（1）主要套装试剂
1）卡马西平抗体（15 ml1瓶）：含1%的羊抗卡马西平多克隆抗体，基质为磷酸缓冲液，含有蛋白稳定剂，叠氮钠作为防腐剂。
2）前处理溶液（8.6ml 1瓶）：含表面活性剂的磷酸缓冲液，叠氮钠作防腐剂。
3）卡马西平荧光标记物（15.1ml 1瓶）：含0.01%的卡马西平荧光标记物，基质为含有表面活性剂的磷酸缓冲液，叠氮钠作防腐剂。
（2）其他辅助试剂
1）探针清洗液：仪器探针清洗液（220ml两瓶）：含2%的氢氧化四乙胺（TEAH），15~30℃保存。
2）溶液 4稀释液（10L 1瓶）：含0.1mol/L磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗微生物剂。15~30℃保存。
3.套装试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，不得冻存，开盖后试剂在仪器冷藏位上的稳定期是336小时。
4.质控品 Bio-Rad公司Liquichek人血清未定值临床化学控制品，691及692两个水平。
5.校准品 Abbott公司单项校准液（7A69-01），靶值参见不同批号说明书。
【参数设置】
1.测定全称：Carbamazepine
2.测定简称：Carb
3.测定编号：656
4.测定版本：1
5.校准版本：00
6.测定文件修正版：500
7.测定开启：ON
8.测定方式：FPIA
9.校准品测定次数：2
10.Cal A浓度：0.00
11.Cal B浓度：2.00
12.Cal C浓度：4.00
13.CalD浓度：8.00
14.Cal E浓度：12.00
15.Cal F浓度：20.00
16.默认稀释方式：不稀释
17.默认校准方法：标准方式
18.结果浓度单位：μg/ml
19.结果小数点位置：2
20.最大背景强度：25 500.0000
21.最小强度：21 000.0000
22，治疗浓度下限：4.00
23.治疗浓度上限：12.00
24.测定最小值：0.75
25.测定最大值：200.00
26.采用不稀释方式的最低浓度：0.00
27.采用不稀释方式的最高浓度：20.00
28.采用第一稀释方式的最低浓度：1.00
29.采用第一稀释方式的最高浓度：40.00
30.采用第二稀释方式的最低浓度：2.00
31.采用第二稀释方式的最高浓度：80.00
【项目校准】
1.更换试剂批号后，应校准。
2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
【性能参数】
1.精密度批内变异2.6%~3.2%，总变异4.126~6.9%。
2.准确度 回收率平均为99.8%±3.0%。
3.灵敏度 最低检测限0.50μg/ml（95%置信区间）。
4.特异性 卡马西平的主要代谢产物卡马西平-10，11环氧化物浓度达3.0μg/ml时，卡马西平测定值的变化≤2.5μg/ml。卡马西平类似物抗抑郁药地昔帕明浓度达0.5μg/ml时，卡马西平测定值的变化≤2.7μg/ml。
5.干扰物质 血液中胆红素含量15mg/dl，血红蛋白含量1.0g/dl，甘油三酯含量806mg/dl，总蛋白含量3.0~10g/dl，对卡马西平测定的干扰率小于10%；
6.相关性 与雅培公司TDx/TDxFLx卡马西平测定相关系数为0.995。
【有效治疗浓度】
4~12μg/ml。
【临床意义】
FK506的药理作用：FK506可以与一组称为FK506结合蛋白（FKBPs）的蛋白质结合，该蛋白与他克莫司、钙调节蛋白、钙神经素A和B结合形成一个五聚体，可抑制钙神经素的磷酸酶活性。而转录因子需要脱磷酸化后才能进入细胞核，因此，此蛋白聚合体可抑制T细胞的增殖和作用。
FK506的吸收和代谢：可静脉注射或口服，胃肠道吸收不规律。药代动力学研究显示其代谢的个体差异和移植器官的差异很大。在血液中主要与红细胞结合，在肝脏和小肠微粒体中通过细胞色素P450分解代谢，血液中有九个主要代谢产物。其副作用主要是可以造成肾损害即肾毒性，其次还有神经毒性，可以引起高血压、失眠和恶心。
TDM的意义：FK506主要用于器官移植后的抗排异治疗，血药浓度与药效和副作用相关，血药浓度低于治疗浓度容易引起器官排异，血药浓度过高则会出现药物副作用。
【标本要求】
1.空腹服药前（谷浓度）取静脉血2.5ml（EDTA抗凝全血）。
2.全血标本2~8℃可稳定7天，-10℃以下可稳定6个月。
【方法与原理】
1.方法 竞争结合法、化学发光微粒子免疫分析（Chemiluminescent Mi-croparticle ImmunoAssay，CMIA）。
2.原理 标本、稀释液和包被FK506抗体的磁化微粒子在反应杯中混合，样品中的FK506与抗体发生抗原抗体反应，形成免疫复合物后被固定在微粒子上。然后在反应杯中加入吖啶酯标记的FK506进行孵育，标记抗原和样品中的FK506竞争微粒子上的结合位点。磁化微粒子被磁铁吸附到反应杯壁上，进行冲洗后，将未结合的标记物去掉。最后在分析系统中加入预激发液（过氧化氢）和激发液（氢氧化钠），使吖啶酯转化成N-甲基吖啶酯，并发光。发光强度以相对发光单位（relative light units，RLUs）表示，它与样品中的FK506浓度呈负相关。
【仪器】
Abbott ARCHITECT I2000全自动免疫分析仪。
【试剂】
1.试剂厂商Abbott。
2.试剂
（1）主要套装试剂
1）微粒子（6.6ml 1瓶）：含鼠抗FK506单克隆抗体的微粒子，基质为EDTA缓冲液，含有蛋白（小牛血清）稳定剂，最低浓度为0.09%固体物质，叠氮钠和ProClin 950作为防腐剂。
2）标记物（7.8ml 1瓶）：含FK506-吖啶酯标记物，基质为枸橼酸缓冲液，含蛋白（小牛血清）稳定剂。最低浓度5.0ng/ml。ProClin300作防腐剂。
3）稀释液（8.9ml 1瓶）：含MES缓冲液和氯化钠。稳定剂为ProClin950和ProClin300。
（2）其他辅助试剂
1）预激活剂：含1.32% （W/V）过氧化氢，需2~4℃冷藏。
2）激活剂：含0.35mol/L氢氧化钠。
3）冲洗液：磷酸缓冲液盐溶液，稳定剂为抗微生物试剂。
4）FK506全血样品沉淀剂（20.4ml 1瓶）：室温保存。含硫酸锌甲醇溶液和乙烯乙二醇。
5）样品前处理试管（灰帽）：含EDTA-K2。
3.套装试剂稳定性未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，含有微粒子的试剂应保持直立，不得冻存，开盖后试剂在仪器冷藏位上的稳定期是30天。
4.质控品Abbott公司配套控制品（3C10-10），三个水平。
5.校准品Abbott公司单项校准液（1L77-01），靶值参见不同批号说明书。
【参数设置】
1.测定全称：Tacrolimus
2.测定类型：一步法
3.测定编号：411
4.测定版本：1
5.校准版本：1
6.测定开启：ON
7.测定方法：CMIA
8.校准方法：4PLC Y
9.校准品测定次数：2
10.Cal A浓度：0.0
11.Cal B浓度：3
12.Cal C浓度：6
13.Cal D浓度：12
14.Cal E浓度：20
15.Cal F浓度：30
16.默认稀释方式：不稀释
17.手工稀释：开启
18.结果单位：ng/ml
19.稀释下限：0
20.稀释上限：30
21.线性下限：0
22.线性上限：30
【样本提取及测定】
1.样品（包括校准液、质控品和患者标本）置于室温下复温至15~30℃，颠倒混匀5~10次，保存时间长的样品应增加混匀次数，避免剧烈振荡产生气泡。
2.取全血200μl置于塑料离心管底部，再缓慢吸取200μl沉淀剂沿管壁加入塑料离心管中，立即盖上离心管盖（提取液易挥发）。
3.立即在涡旋混匀器上振荡20秒，12000转/分钟离心5分钟。
4.将上清液倒入样品前处理试管中（灰帽管），在涡旋混匀器上振荡20秒。
5.样品浓度高于30ng/ml时，用校准液的CALA对倍稀释后，重新提取测定。
6.提取液易挥发，故应减少上机等待时间。应保证Tacrolimus测定优先进行，提取后的样品要在30分钟内测定完毕，一次上机样品不能多于100个。
【项目校准】
1.更换试剂批号后，应校准。
2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
【性能参数】
1.精密度 批内变异2.4%~5.8%，总变异3.5%~6.7%。
2.准确度 回收率为98%~107%。
3.灵敏度 最低检测限0.8ng/m1（95%置信区间）。
4.特异性 与FK506的主要代谢产物M-I（13-O-去甲基他克莫司）的交叉反应率为8%，M-Ⅱ（31-O去甲基他克莫司）为94%，M-Ⅲ（15-O-去甲基他克莫司）为45%，M-ⅠⅤ（12-羟基他克莫司）为9%，M-V~M-Ⅷ未评估。
5.干扰物质 内源性物质总胆红素浓度40mg/dl、甘油三酯800mg/dl、胆固醇500mg/dl、总蛋白3g/d和12g/dl，尿酸20mg/dl，血细胞比容≤25%和≥55%时，浓度为5.5~18.0ng/ml的FK506回收率为96%~105%。HAMA和RF因子对测定干扰很小，FK506的回收率分别为97%和99%（n=10）。未见其他药物对测定有干扰（详见试剂说明书）。
6.相关性 与LC/MSlMS方法的相关系数≥0.90，绝对偏差0.51ng/ml（0.31~0.71ng/ml，95%置信区间）。
【有效治疗浓度】
未定，随移植器官和治疗时期不同而有所不同。
【临床意义】
万古霉素是糖肽类抗生素，对革兰阳性球菌有较强的抗菌作用，特别是对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌敏感，对大多数链球菌也非常敏感。TDM的目的一是要保证疗效，二是要防止低剂量反复使用造成的耐药，三是防止浓度过高造成耳毒性和肾毒性。治疗方案调整时，增大药物剂量使峰浓度升高，延长给药间隔使谷浓度下降。该药物主要通过肾小球滤过消除，故患者的肾功能影响药物的清除，除根据血药浓度的高低调整药物剂量外，还需根据内生肌酐清除率调整药量。
【标本要求】
1.下次静滴前（谷浓度）或静滴停止后半小时（峰浓度）取静脉血3ml（血清或肝素、枸橼酸钠、草酸盐/氟化钠、EDTA抗凝血浆）。
2.血清/血浆分离后2~8℃可稳定24小时，-10℃以下可稳定168小时。
3.首次用药达稳态时间为24~36小时，应于达稳态后抽血。
【方法与原理】
1.方法 竞争结合法、荧光偏振免疫分析（FPIA）。
2.原理 样本中的万古霉素（被分析物）、荧光标记的万古霉素（标记物）和抗万古霉素抗体同时加入反应杯中。样本中的万古霉素和试剂中标记的万古霉素与万古霉素抗体竞争性结合，如果样本中万古霉素含量高，则未结合的标记物多，如果样本中万古霉素含量低，则未结合的标记物少（参见图1-1）。
未结合的标记物分子较小，当被偏振光激发时快速转动，不能够发出统一方向的荧光，因此偏振光读数降低（参见图1-2）。
与抗体结合的标记物分子较大，当被偏振光激发时转动速度很慢，能够发出单一方向的荧光，因此偏振光读数升高（参见图1-3）。
AxSYM系统通过测定与抗体结合的标记物所发出的偏振荧光的变化量，达到检测标本中万古霉素含量的目的。偏振光变化量越大，被测药物的浓度越低。
【仪器】
Abbott AxSYM全自动免疫分析仪。
【试剂】
1.试剂厂商 Abbott。
2.试剂
（1）主要套装试剂
1）万古霉素抗血体（15.0ml 1瓶）：25%鼠抗万古霉素单克隆抗体，基质为缓冲液，含蛋白稳定剂和叠氮钠。
2）前处理溶液（8.6ml 1瓶）：溶解于Tris缓冲液的表面活性剂，叠氮钠作为防腐剂。
3）万古霉素荧光标记物（15.1ml 1瓶）：0.01%万古霉素荧光标记物，基质为缓冲液，含表面活性剂和稳定剂，防腐剂为ProClin® 300。
（2）其他辅助试剂
1）探针清洗液：仪器探针清洗液（220ml两瓶）：含2%的氢氧化四乙胺（TEAH），15~30℃保存。
2）溶液4稀释液（10L 1瓶）：含0.1mol/L磷酸缓冲液，防腐剂为叠氮钠和抗微生物剂。15~30℃保存。
3.套装试剂稳定性 未开盖试剂2~8℃保存至试剂盒标示效期，不得冻存，开盖后试剂在仪器上的稳定期是112小时。
4.质控品 Bio-Rad公司Liquichek人血清未定值临床化学控制品，691及692两个水平。
5.校准品 Abbott公司单项校准液（5875-01），靶值参见不同批号说明书。
【参数设置】
1.测定全称：Vancomycin
2.测定简称：Vanco-Ⅱ
3.测定编号：668
4.测定版本：1
5.校准版本：00
6.测定文件修正版：200
7.测定开启：ON
8.测定方式：FPIA
9.校准品测定次数：2
10.Cal A浓度：0.00
11.Cal B浓度：5.00
12.Cal C浓度：10.00
13.Cal D浓度：25.00
14.Cal E浓度：50.00
15.Cal F浓度：100.00
16.默认稀释方式：不稀释
17.默认校准方法：标准方式
18.结果浓度单位：μg/ml
19.结果小数点位置：2
20.最大背景强度：10 000.0000
21.最小强度：14 500.0000
22.测定最小值：3.00
23.测定最大值：1000.00
24，采用不稀释方式的最低浓度：0
25.采用不稀释方式的最高浓度：100.00
26.采用第一稀释方式的最低浓度：90.00
27.采用第一稀释方式的最高浓度：200.00
28.采用第二稀释方式的最低浓度：180.00
29.采用第二稀释方式的最高浓度：400.00
【项目校准】
1.更换试剂批号后，应校准。
2.质控失控后，在进行其他相应处理后，质控结果仍不满意的，应重新校准。
3.维护保养后如更换光源、仪器光路校正后、更换管路等应校准。
【性能参数】
1.精密度 批内变异2.61%~4.25%，总变异2.9426~4.26%。
2.准确度 回收率平均为102.5%±2.5%。
3.灵敏度 最低检测限2.00μg/ml（95%置信区间）。
4.特异性 万古霉素的结晶状降解产物CDP-1浓度达50μg/ml时，万古霉素测定值的变化小于其最低检测限（2.0μg/ml）。
5.干扰物质 血液中胆红素含量20mg/dl，血红蛋白含量1.0g/dl，甘油三酯含量2300mg/dl，总蛋白含量3.0~10.0g/dl，对万古霉素测定的干扰率小于10%。
6.相关性 与HPLC方法的相关系数为0.98。
【有效治疗浓度】
尚无定论，目前认为峰浓度超过50μg/ml，谷浓度超过20μg/ml有潜在中毒的危险。
【临床意义】
1.α-地中海贫血的诊断旷地中海贫血是一种遗传性疾病，病因是由于珠蛋白的α链合成减少，β链和γ链合成相对增多。如果血红蛋白四个亚基中无α链，则形成γ链四聚体即Hb Barts或β链四聚体即HbH4。控制α链合成的基因位于第16号染色体，每条染色体上有两个α基因。如两个α基因均缺失，α链合成完全抑制（a0），称α-海洋性贫血1；如仅缺失一个α基因，则α链合成部分受抑制（α+），称α-海洋性贫血2；另有一种因终止密码突变而产生的异常血红蛋白（Hb constant spring，HbCS），α链合成能力亦明显降低。由上述三种基因相互作用构成各种类型的α-地中海贫血：
（1）-/αα和α-/α-基因型为α-地中海贫血标准型，不贫血或轻微贫血，血红蛋白电泳正常或HbA2轻度降低。
（2）αα/α-基因型为α-地中海贫血静止型，不贫血或轻微贫血，血红蛋白电泳正常或HbA2轻度降低。
（3）-/a-基因型为血红蛋白H病，临床表现为慢性贫血，血红蛋白电泳出现HbH条带，占5%~40%，并可有少量Hb Barts，若还有终止码突变，则还可出现HbCS条带，HbA、HbA2及HbF减少。
（4）基因型为胎儿水肿综合征，临床为妊娠晚期死胎，血红蛋白电泳HbBart占100%。
2.β-地中海贫血的诊断 β-地中海贫血也是一种遗传性疾病，病因是β链合成部分受抑（β+基因）或完全抑制（β0基因）。β链合成抑制引起δ链和γ链合成增加，HbA2或HbF升高。如βδ链合成同时受抑制（δβ+基因），则称为βδ海洋性贫血。β-地中海贫血临床上可分为三种类型：
（1）重型β-地中海贫血（亦称Cooley）贫血：患者一般为β+、β0基因纯合子，血红蛋白常低于6g/dl，呈小细胞低色素性贫血，靶形红细胞10%~35%。血红蛋白电泳HbF 30%~90%，甚至可达100%，HbA多低于40%，或可低至0。
（2）中间型β-地中海贫血：血红蛋白可维持在6.0~7.0g/dl以上，是具有多种遗传方式的血红蛋白病，如症状较轻的纯合子β-地中海贫血、贫血与脾肿大明显的杂合子β-地中海贫血等。血红蛋白电泳HbA降低，HbA2或（和）HbF升高。
（3）轻型β-地中海贫血：父母中至少有1人患同样疾病，临床可无症状或仅轻度贫血。特征表现为电泳时HbA2升高，约90%以上患者HbA2含量4%~8%。
3.异常血红蛋白病
（1） HbD型：HbD不是单一的血红蛋白，而是一类异常血红蛋白，共同特点是其电泳位置位于HbF和HbS之间，临床表现为轻度贫血或不贫血，在我国有少数病例。
（2） HbE型：HbE血红蛋白是β链上的第6位谷氨酸被赖氨酸取代后产生的异常血红蛋白，电泳位置位于HbS和HbA2之间，是我国最常见的异常血红蛋白类型。纯合子有轻度溶血性贫血，HbE可达90%以上；与HbA的杂合子无贫血和其他临床症状相似，HbE占30%~40%；与（一地中海贫血基因的双重杂合子症状与重型β-地中海贫血相似，HbE占60%~80%，HbF占15%~40%；与α-地中海贫血的双重杂合子，一般没有症状，与α+杂合子HbE占i5%~20%，与α0杂合子HbE占23%~32%。
（3） HbS型：HbS是血红蛋白β链第6位谷氨酸被缬氨酸取代后产生的异常血红蛋白，电泳位置位于HbD和HbE之间。该蛋白当处于缺氧状态时，溶解度降低，使红细胞变形如镰刀状，故被称为镰状细胞，该病主要见于非洲和美洲黑人。
【标本要求】
1.取静脉血2.0ml（EDTA抗凝全血）。
2.全血标本2~8℃可保存5天。
【方法与原理】
血红蛋白是一种结合蛋白，由珠蛋白和血红素构成，血红素由原卟啉与亚铁原子组成。每一个珠蛋白分子都是由两对肽链组成的四聚体，一对是a链，另一对是非α链，有β、γ、δ、ζ和ε种。不同类型的血红蛋白结构略有不同，但血红素均相同。正常人血红蛋白具有三种类型：HbA、HbF和HbA2。HbA=α2β2，HbA2＝α2δ2，HbF= α2γ2。
人体的血红蛋白异常有两种情况：血红蛋白性质或结构异常称之为血红蛋白病，血红蛋白中的一种肽链合成减少引起某种血红蛋白数量异常，称之为地中海贫血。
不同类型的血红蛋白具有不同的肽链组成，其表面所带电荷性质和电荷量不同，因此在电场中的电泳行为不同，利用此性质对其进行电泳，即可将不同类型的血红蛋白进行分离测定。
pH＞3时，毛细管表面形成双电层，管壁所带的正电荷在高压电场的作用下向阴极移动，即电渗。pH为9.4时，大部分的血红蛋白带负电荷，电泳力迫使它们向阳极泳动，血红蛋白在电场中受力为电渗力和电泳力的矢量和。由于电渗力远远大于电泳力，因此带电粒子将向阴极移动。带负电荷越多的血红蛋白，越晚到达阴极，其到达阴极的顺序为HbA2、HbF和HbA。如果出现异常血红蛋白，其到达阴极的顺序为：HbCS、HbA2、HbE、HbS、HbD、HbG、HbF、HbA、HbBarts、HbJ、HbN、HbH。仪器在阴极侧测定415nm的吸光度获得各血红蛋白条带的相对浓度（百分比）。
【仪器】
法国Sebia公司全自动毛细管电泳仪系列。
【试剂】
1.试剂
（1）缓冲液：含碱性缓冲液（pH9.4）。2~8℃保存。
（2）清洗液：将70ml储存清洗液用蒸馏水稀释至700ml。室温或2~8℃保存，室温可保存3个月。
（3）溶血液：室温或2~8℃保存。
（4）正常人冻干质控品：2~8℃保存至有效期。1ml蒸馏水溶解，复溶后，2~8℃可保存一周，-20℃可保存6个月。
2.CAP CLEAN含蛋白酶，表面活性剂和添加剂。2~8℃保存至有效期。
3.次氯酸工作液将浓次氯酸溶液（9.6%）250ml用蒸馏水稀释至1L，制成2%~3%的次氯酸工作液。远离光、热、酸和氨，室温可稳定1年。
【参数设置】
1.温度： 34℃
2.进样器真空度：8mBar
3.进样时间： 6秒
4.电泳电压： 9800V
5.电泳时间： 495秒
6.样品稀释倍数：6倍
7.检测波长： 415 nm
8.数据采集延迟：240秒
【操作步骤】
1.标本处理 全血标本3000转/分钟离心5分钟，尽量弃除上层血浆。
2.打开Minicap仪器及电脑。
3.缓冲液从冰箱中取出后复温至室温，打开仪器右侧试剂舱门，装上试剂，并装上白色稀释杯。
4.启动电泳软件，输入密码“46448630”。
5.质控 打开样品舱门，将全血质控品放入炮弹管中，插入贴有正常人质控条码的试管内，将条码朝向外侧，放在样品盘的28号位，29号位放一满管（尿管）溶血素，关上样品舱门，选择“继续实验”。仪器扫描条码后，选择质控次数，一般为2次，按“OK”开始质控。质控结果应为HbA22.7%±0.5%，各区带不应出现明显漂移而不被积分。
6.测试样品 打开样品舱，将被测样品混匀后从1号位开始顺序插入样品架中，条码朝外，关上舱门后继续实验。
7.仪器状态显示窗口提示更换试剂或报警时，在“ready”状态，点击“更换试剂瓶”，选择需要更换的试剂，打开试剂舱门后，更换试剂，并输入试剂批号和ID号，关上试剂舱门，按“确定”。
8.查看和编辑结果 点击编辑图标查看结果。
9.传输数据到Lis 点击数据传输图标，输入起始号和终止号，传输数据。
【性能参数】
1.重复性
（1）同一泳道不同批号缓冲液重复性：CV%值HbA 0.1%~0.4%，HbA20~2.0%，HbF 0.5%~10.2%。
（2）不同泳道间重复性：HbA 0~1.9%，HbA20~2.7%， HbF 0.7%~8.8%，HbS 0.5%~1.6%，HbE 5.8%~15.3%
（3）批间重复性：HbA 0.04%~1.3%，HbA21.0% ~2.2%，HbF 0.9%~8.5% ，HbS 0.9%~1.3%，HbE 11.3%。
2.线性 将血标本进行不同比例的稀释，电泳结果呈线性。
3.准确性 与HPLC系统的相关性HbA20.947，HbF0.995。
【参考范围】
成人和2岁以上儿童：HbA： 94.3%~98.5%， HbF：O~2.0%，HbA2：1.526~3.7%。
13~ 23个月儿童：HbA： 94.5%~98.2%， HbF：0.2%~2.0%，HbA2：1.6%~3.5%。
9~12个月婴儿：HbA： 91.7%~96.7%， HbF：1.3%~5.o%， HbA2：2.0%~3.3%。
6~8个月婴儿：HbA： 83.5%~95.8%，HbF：2.3%~13.0%， HbA2：1.9%~3.5%。
5个月新生儿：HbA： 74.9%~95.6%， HbF：2.3%~22.0%， HbA2：2.1%~3.1%。
4个月新生儿：HbA： 68.2%~88， 6%， HbF：9.4%~29.0%， HbA2：2.0%~2.8%。
3个月新生儿：HbA： 41.0%~84.0%， HbF： 15.0%~56.0%， HbA2：1.0% ~3.0%。
2个月新生儿：HbA： 37.1%~70.6%， HbF： 29.0%~61.0%，HbA2：0.4% ~1.9%。
0~1个月新生儿：HbA：17.7% ~54.0%， HbF： 46.0% ~81.0%， HbA2：0~1.3%。
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